[發明專利]一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養液中檸檬酸的方法

有效

• 申請號: 201410784313.0
• 申請日: 2014-12-16
• 公開（公告）號: CN104569185A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發明（設計）人: 王言;唐慶九;余昌霞;曹暉;汪虹;陳明杰
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/60
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達

1.一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養液中檸檬酸的方法，包括：

(1)分別取草酸、檸檬酸、酒石酸、甲酸、丁酸標準品置于容量瓶中，加超純水定容作儲備液；將儲備液稀釋配制不同濃度的混標，進樣分析，根據峰面積和有機酸含量繪制標準曲線；

(2)選用SH1011柱和KC-811柱為分析柱，SH-G柱為保護柱，色譜條件為：流動相4mmol/L高氯酸溶液，柱溫為60℃，流動相流速1.0mL/min，紫外可見檢測器檢測，波長210nm；

(3)取待測食用菌斜面培養物，活化后打碎，接入到PDB液體培養基中搖床培養，定期取樣，無紡布過濾菌絲，濾液離心后取上清液備用；

(4)分別取步驟(3)中的上清液1mL，濾膜過濾后上樣，上樣量10μL，采用和標準品相同的條件重復檢測；根據樣品對應檸檬酸的峰面積和標準曲線，計算樣品中檸檬酸的含量。

2.根據權利要求1所述的一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養液中檸檬酸的方法，其特征在于：所述步驟(1)中的不同濃度具體為草酸200μg/mL，檸檬酸200μg/mL，酒石酸200μg/mL，甲酸1μL/mL，丁酸1μL/mL。

3.根據權利要求1所述的一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養液中檸檬酸的方法，其特征在于：所述步驟(1)中檸檬酸在精密度實驗中的RSD為1.91％，在重復性實驗中的RSD為3.00％，在穩定性實驗中的RSD為3.58％，標樣回收率為99.5％。

4.根據權利要求1所述的一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養液中檸檬酸的方法，其特征在于：所述步驟(2)中的SH1011柱的參數為：8.0mm×3000mm，6μm；KC-811柱的參數為：8.0mm×3000mm，6μm；SH-G柱的參數為：6.0mm×50mm，10μm。

5.根據權利要求4所述的一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養液中檸檬酸的方法，其特征在于：三個色譜柱串聯使用，串聯先后順序為SH-G柱串聯SH1011柱串聯KC-811柱。

6.根據權利要求1所述的一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養液中檸檬酸的方法，其特征在于：所述步驟(3)中的食用菌為杏鮑菇XH、金針菇G1或金針菇F29。

7.根據權利要求1所述的一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養液中檸檬酸的方法，其特征在于：所述步驟(4)中的打碎具體為高低檔間隔打碎50s，直徑0.6cm且菌齡相同的菌塊個數與無菌水容積比為2.5:1。

8.根據權利要求1所述的一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養液中檸檬酸的方法，其特征在于：所述步驟(4)中的濾膜孔徑為0.22μm。