[發明專利]一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養液中草酸的方法

有效

• 申請號: 201410784281.4
• 申請日: 2014-12-16
• 公開（公告）號: CN104569183A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發明（設計）人: 唐慶九;王言;曹暉;余昌霞;汪虹;陳明杰
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/46
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達

技術領域

本發明屬于食用菌培養液中有機酸的測定領域，特別涉及一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養液中草酸的方法。

背景技術

有機酸作為生物生長過程中的代謝產物會不斷變化，食用菌生長過程中培養料內的有機酸逐漸積累導致pH下降，直接影響菌絲細胞的新陳代謝和整個生命活動，所以了解菌絲有機酸的種類和變化，有利于了解其代謝機制，更好的調控培養條件使之更適合菌絲的生長。

目前分析有機酸的方法主要有：酸堿滴定法、氣相色譜法、薄層色譜法及高效液相色譜法等。酸堿滴定法只能測定總酸量，且操作繁瑣；氣相色譜法需衍生步驟，誤差較大；薄層色譜法定量精度差；而高效液相色譜法操作簡便，準確度高，重現性好，可同時定量多種有機酸，已被廣泛用于各種食品和天然物中有機酸的測定。但不同的柱子針對不同的物質分離所需的色譜條件不同，利用串聯離子排阻色譜柱(SH1011和KC-811，Shodex公司)對食用菌培養液中有機酸的定性定量檢測尚未見報導。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養液中草酸的方法，該方法簡單，耗時少，精密度高，重復性好，穩定性好。

本發明的一種利用離子排阻色譜柱檢測食用菌培養液中草酸的方法，包括：

(1)分別取草酸、檸檬酸、酒石酸、甲酸、丁酸標準品置于容量瓶中，加超純水定容作儲備液；將儲備液稀釋配制不同濃度的混標，進樣分析，根據峰面積和有機酸含量繪制標準曲線；

(2)選用SH1011柱和KC-811柱為分析柱，SH-G柱為保護柱，色譜條件為：流動相4mmol/L高氯酸溶液，柱溫為60℃，流動相流速1.0mL/min，紫外可見檢測器檢測，波長210nm；

(3)取待測食用菌斜面培養物，活化后打碎，接入到PDB液體培養基中搖床培養，定期取樣，無紡布過濾菌絲，濾液離心后取上清液備用；

(4)分別取步驟(3)中的上清液1mL，濾膜過濾后上樣，上樣量10μL，采用和標準品相同的條件重復檢測；根據樣品對應草酸的峰面積和標準曲線，計算樣品中草酸的含量。

所述步驟(1)中的不同濃度具體為草酸200μg/mL，檸檬酸200μg/mL，酒石酸200μg/mL，甲酸1μL/mL，丁酸1μL/mL。

所述步驟(1)中草酸在精密度實驗中的RSD為0.65％，在重復性實驗中的RSD為0.92％，在穩定性實驗中的RSD為0.77％，標樣回收率為102％。

所述步驟(2)中的SH1011柱的參數為：8.0mm×3000mm，6μm；KC-811柱的參數為：8.0mm×3000mm，6μm；SH-G柱的參數為：6.0mm×50mm，10μm。

三個色譜柱串聯使用，串聯先后順序為SH-G柱串聯SH1011柱串聯KC-811柱。

所述步驟(3)中的食用菌為杏鮑菇XH、金針菇G1或金針菇F29。

所述步驟(4)中的打碎具體為高低檔間隔打碎50s，直徑0.6cm且菌齡相同的菌塊個數與無菌水容積比為2.5:1。

所述步驟(4)中的濾膜孔徑為0.22μm。

所述步驟(4)中所取的樣品菌絲生長要正常，平行間的差別盡量小。

通過利用離子排阻色譜柱(SH1011和KC-811串聯，Shodex公司)對食用菌培養液中的草酸定性定量的測定方法，該方法精密度高，重復性好，穩定性強，可快速高效的檢測出食用菌培養液中草酸的含量。對特定種類真菌菌絲培養液的草酸的標準曲線一經建立可重復使用，且樣品前處理簡單易行，需時少。

本發明通過利用離子排阻色譜柱(SH1011和KC-811串聯，Shodex公司)對食用菌培養液中的草酸定性定量的測定方法，樣品前處理簡單。檢測系統一經確定可對相應培養模式或生長環境中的真菌菌絲培養液中的草酸進行長期、穩定的監測。

有益效果

(1)本發明的方法簡單，用時少，樣品前處理簡單；待測種類真菌的菌絲培養液離心取上清，0.22μm濾膜過濾即可上樣；

(2)本發明的方法精密度高，重復性好，穩定性強，草酸的RSD都小于5％；

(3)本發明檢測系統一經確定可對相應培養模式或生長環境中的真菌菌絲培養液中的草酸進行長期、穩定的監測。

附圖說明

圖1為5種有機酸標準品混標的液相圖譜；其中，1為草酸；2為檸檬酸；3為酒石酸；4為甲酸；5為丁酸。

圖2為草酸標準品圖譜；