[發(fā)明專利]草莓超低溫療法脫毒再生苗病原體檢測(cè)的方法無效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201410784226.5 | 申請(qǐng)日： | 2014-12-16 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN104480222A | 公開（公告）日： | 2015-04-01 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 羅婭;湯浩茹;邱靜;王小蓉;張勇;陳清;孫勃;鄧群仙;李雁翎;田鈺 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 四川農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/70 | 分類號(hào)： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/94 |
| 代理公司： | 四川君士達(dá)律師事務(wù)所 51216 | 代理人： | 芶忠義 |
| 地址： | 625014 四川省雅*** | 國(guó)省代碼： | 四川;51 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 草莓 超低溫 療法 脫毒 再生 病原體 檢測(cè) 方法 | ||
1.草莓超低溫療法脫毒再生苗病原體檢測(cè)的方法，其特征在于，具體包括如下步驟：
(1)田間苗提取總RNA：采用改良3％CTAB法提取草莓葉片總RNA；
(2)總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA：以提取的總RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板，內(nèi)參引物對(duì)為295bp大小，進(jìn)行常規(guī)PCR反應(yīng)；
(3)設(shè)計(jì)四種病毒引物；
(4)單一RT-PCR檢測(cè)田間苗：取逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA?1μl進(jìn)行單一PCR反應(yīng)，檢測(cè)試驗(yàn)材料草莓中是否含有四種常見草莓病毒，PCR體系中所加的引物為篩選的合適引物，濃度為0.2μmol·L-1，體系中還包括：TaqMix?10ml，用超純水補(bǔ)充至20μl，整個(gè)操作必須在冰上進(jìn)行；PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃，3min；94℃，1min；退火溫度，40s；72℃，40s，35個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸5min，用2.0％的瓊脂糖凝膠電泳EB染色檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物；
(5)多重RT-PCR病毒檢測(cè)體系：根據(jù)已篩選出的適合多重RT-PCR反應(yīng)的引物，通過對(duì)PCR體系的不斷優(yōu)化，尋找出適合多重引物的最優(yōu)PCR條件，多重PCR體系中，引物濃度為0.1～0.5μmol·L-1，20mmol·L-1MgCl2濃度為1.6～2.4μl，10×PCR?Buffer?2μl，dNTPs?0.2μl，Taq酶0.4μl，最后用超純水補(bǔ)足至20μl，PCR反應(yīng)的退火溫度為52℃～58℃，退火時(shí)間為40s，延伸溫度68℃～72℃和延伸時(shí)間40s～2.0min在多重PCR中被試驗(yàn)，用2.0％的瓊脂糖凝膠電泳EB染色檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，未經(jīng)四川農(nóng)業(yè)大學(xué)許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購(gòu)買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請(qǐng)聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201410784226.5/1.html，轉(zhuǎn)載請(qǐng)聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
