[發明專利]用于靜脈采集和自體移植的改進的方法和組合物

在審

• 申請號: 201410779180.8
• 申請日: 2010-12-08
• 公開（公告）號: CN104623665A
• 公開（公告）日: 2015-05-20
• 發明（設計）人: 科琳·布羅菲;帕德米尼·科馬拉維拉斯;喬伊斯·莊-弗林;凱爾·霍金;蘇珊·伊格爾
• 申請（專利權）人: 范德比爾特大學;美國政府;由退伍軍人事務部代表
• 主分類號: A61K45/00
• 分類號: A61K45/00;A61K31/727;A61P41/00;A61P9/14;A61P7/02;A01N1/02;A61F2/06
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 鄭斌;彭鯤鵬

本申請是申請號為201080055389.X、發明名稱為“用于靜脈采集和自體移植的改進的方法和組合物”的申請的分案申請，該母案申請是2010年12月8日提交的PCT申請PCT/US2010/059459進入中國國家階段的申請。

相關申請的交叉引用

本申請要求2010年12月8日提交的序列號為No.61/267,640的美國臨時申請的優先權，其全部內容通過引用合并到本文中。

技術領域

本發明一般地涉及如下領域：自體靜脈、靜脈移植、靜脈保存、組織保存、內膜增生、血管痙攣、藥物、設備以及血管生物學。

本發明在來自國立衛生研究院的資助No.2R01?HL070715的政府支持下進行。政府擁有本發明的某些權利。

背景技術

人大隱靜脈(HSV)仍然是用于冠狀和外周動脈旁路移植的最常用管道。HSV通常用直接手術暴露或者內窺鏡靜脈采集從腿采集。將分支結扎并且將靜脈取出，并在植入之前置于“后臺(back?table)”。多數外科醫生將HSV在室溫下置于肝素化鹽溶液中。在遠端對靜脈進行插管并且用肝素化鹽溶液人工擴張(用注射器)。這允許對在采集過程中遺漏的分支進行鑒別和結扎。這種人工擴張引起靜脈損傷。靜脈還可用外科皮膚標記物進行標記，從而在植入期間優化其取向。

在全世界每年進行的超過1百萬例冠狀旁路手術中，10％至15％的冠狀靜脈移植物發生早期血栓性阻塞；還有10％至15％在之后的1年至5年由于內膜增生而發生阻塞，再有30％至40％在隨后的5年至7年中?由于內膜增生與進行性動脈粥樣硬化的疊加而發生阻塞。12年后少于一半的靜脈移植物仍有效(Motwani&Topol，1998)。靜脈移植物阻塞引起心肌梗塞、肢體喪失以及死亡。

動脈旁路移植失敗的首要原因是內膜增生(Clowes&Reidy，1991)。盡管血管介入近來有許多技術發展，但是內膜增生仍然是昂貴的、與疾病相關的并且未解決的問題。內膜增生由一連串事件介導，包括血管平滑肌增殖、遷移、表型轉化以及細胞外基質產生(Allaire&Clowes，1997；Mosse等人，1985)。該過程引起血管腔的病理性變窄、移植物狹窄，并最終引起移植物衰竭(LoGerfo等人，1983)。

測試其抑制內膜增生之能力的許多藥物在臨床試驗中都失敗了。抗血栓劑和抗血小板劑(如華法林(warfarin)、氯吡格雷(clopidogrel)和阿司匹林(aspirin))對內膜增生沒有或幾乎沒有作用(Kent&Liu，2004)。藥物洗出式支架在預防冠狀動脈血管成形術之后的再狹窄中已表現出有效；但是，還沒有治療被批準用于自體管道。使用E2F誘餌(與轉錄因子結合從而隔離這些蛋白質的DNA短序列)預防平滑肌增殖的以預防冠狀和外周血管靜脈移植物衰竭的兩個大型臨床試驗的最初目的失敗了。來自這些大型臨床試驗的數據指出，簡單地限制增殖應答不足以預防內膜增生(Mann等人，1999；Alexander等人，2005)。因此，對于成功預防靜脈移植的失敗而言，需要靶向的是增殖以外的其他機制。

采集期間對靜脈移植物的損傷引起血管痙攣和內膜增生，其導致移植物阻塞。因此，鑒定出防止在采集期間對移植物的損傷以及后續內膜增生的新的外科方法和治療劑將是非常有益的。

發明內容

因此，根據本發明，提供在移植之前處理靜脈外植體的方法，其包括(a)提供靜脈外植體；(b)將所述靜脈外植體在包含P2X₇受體拮抗劑的pH7.0至pH7.6的緩沖溶液中進行穩定化，以產生穩定化靜脈外植體；以及(c)保持所述穩定化靜脈外植體的功能活力。所述方法還可恢復在步驟(b)之前無活力的靜脈外植體的功能活力。本文將平滑肌的功能活力(functional?viability)定義為應答于去極化或激動劑而收縮的能力。對內皮細胞而言，活力定義為預收縮的血管應答于乙酰膽堿而舒張的能力。另外，所述緩沖溶液可進一步包含肝素。所述P2X₇受體拮抗劑可以是羊毛?罌紅/藍染料#1(erioglaucine/Blue?Dye#1)或亮藍G(brilliant?blue?G)，或者它們的組合。所述緩沖溶液還可進一步包含磷酸鹽緩沖液、MOPS、Hepes、Pipes、醋酸鹽或勃脈力(Plasmalyte)。所述pH可以是7.35至7.45，或者7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5或7.6。

另外，所述緩沖溶液可進一步包含硫酸鎂或漢克斯(Hanks’)平衡鹽溶液。