[發明專利]一種用聚乙二醇制備絲素微球的方法

無效

• 申請號: 201410777934.6
• 申請日: 2014-12-16
• 公開（公告）號: CN104592375A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發明（設計）人: 王曉沁;吳建兵;王巖松;錢誠
• 申請（專利權）人: 蘇州絲美特生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435
• 代理公司: 蘇州市中南偉業知識產權代理事務所(普通合伙) 32257
• 代理人: 李廣

技術領域

本發明涉及一種絲素微球的制備方法，具體的說，是一種用聚乙二醇制備絲素微球的方法。

背景技術

絲素蛋白是蠶絲中最重要的組成部分，約占重量的70％，由甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸等18種氨基酸組成，是一種天然蛋白質。絲素蛋白具有優良的理化性能，無毒、無刺激性、生物相容性好、可生物降解，在很大程度上滿足生物材料的需求，同時絲素蛋白具有優異的加工性能，可以制備成膜、凝膠、微球、多孔支架等，為藥物載體提供了廣闊的材料應用范圍。中國專利申請第201310203722.2號公開了一種可注射絲素蛋白原位凝膠的制備方法，該方法通過將絲素蛋白水溶液和聚乙二醇或丙二醇溶液混合后凝固形成凝膠，由于凝膠顆粒的粒徑較小不適用于負載藥物，因此有必要開發一種簡單可行的方法來制備絲素微球以作為藥物載體。

目前制備絲素微球的方法主要有乳劑-有機溶劑蒸發/抽提法、相分離法、自組裝法、超臨界流體快速膨脹法、脂質體模板制備法、微流控法和噴霧干燥法等。乳化法、自組裝法、脂質模板法都需要添加有機溶劑，而有機溶劑的殘留會直接限制絲素微球在臨床上的應用。超臨界流體快速膨脹法、微流控法和噴霧干燥法雖然比較簡單，但裝置和制備條件都比較復雜。相分離法的制備過程雖然相對簡單并安全無毒，但操作流程比較繁瑣。

有鑒于上述的缺陷，本設計人，積極加以研究創新，以期創設一種用聚乙二醇制備絲素微球的方法，使其更具有產業上的利用價值。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明的目的在于克服現有絲素微球制備過程中有機溶劑殘留、工序復雜、耗時長、成本高、不利于產業化生產和臨床應用的缺點，提供一種高效安全、快速簡單、資源利用度好、生產成本低、生物相容性好的絲素微球的制備方法。

本發明提供的一種用聚乙二醇制備絲素微球的方法，其特征在于：包括以下步驟：

將質量百分比為1-30％的絲素蛋白溶液與質量百分比為10-60％的聚乙二醇溶液放置在4-60℃溫度條件下30min，然后按一定比例將所述絲素蛋白溶液和聚乙二醇溶液混合均勻，孵育一定時間后離心洗滌，配制成絲素微球懸浮液。

進一步的，所述聚乙二醇的分子量范圍為2000-20000。

進一步的，所述聚乙二醇的分子量的范圍為4000-20000。

進一步的，所述聚乙二醇分子量為4000、6000的濃度范圍是質量百分比為30-60％；分子量為10000的濃度范圍是質量百分比為20-50％；分子量為20000的濃度范圍是質量百分比為20-40％。

進一步的，所述絲素蛋白溶液的稀釋范圍是質量百分比為5-15％。

進一步的，所述絲素蛋白溶液和聚乙二醇溶液的放置溫度范圍為室溫至60℃。

進一步的，所述絲素蛋白溶液與所述聚乙二醇溶液的體積比范圍是5:1-1:10。

進一步的，所述絲素蛋白溶液與所述聚乙二醇溶液的體積比范圍是2:1-1:5。

進一步的，所述孵育條件為：室溫孵育1-24h。

進一步的，所述絲素蛋白溶液的制備步驟如下：將已脫膠的熟絲浸潤在9.3M的LiBr溶液中并置于60℃烘箱中4h，溶解后得到絲素蛋白溶液；將該絲素蛋白溶液倒入透析袋中用去離子水透析3d；透析結束后將絲素蛋白溶液離心去除不溶物雜質，然后倒入透析袋中用分子量20000、15wt％的聚乙二醇溶液透析24h，獲得濃縮絲素蛋白溶液。

借由上述方案，本發明至少具有以下優點：本發明選擇藥用助劑聚乙二醇與絲素蛋白溶液共混來制備絲素微球，制備過程不需要復雜的裝置，操作流程簡單易行、耗時短、成本低，而且不添加有機溶劑，所制備的絲素微球生物安全性高，可直接應用于臨床。

上述說明僅是本發明技術方案的概述，為了能夠更清楚了解本發明的技術手段，并可依照說明書的內容予以實施，以下以本發明的較佳實施例并配合附圖詳細說明如后。

附圖說明

圖1是分子量4000、濃度40wt％的PEG溶液與8wt％絲素蛋白溶液共混所制備的絲素微球的掃描電鏡圖；

圖2是分子量4000、濃度60wt％的PEG溶液與8wt％絲素蛋白溶液共混所制備的絲素微球的掃描電鏡圖；

圖3是分子量6000、濃度40wt％的PEG溶液與8wt％絲素蛋白溶液共混所制備的絲素微球的掃描電鏡圖；

圖4是分子量6000、濃度60wt％的PEG溶液與8wt％絲素蛋白溶液共混所制備的絲素微球的掃描電鏡圖；

圖5是分子量10000、濃度30wt％的PEG溶液與8wt％絲素蛋白溶液共混所制備的絲素微球的掃描電鏡圖；