[發(fā)明專利]一種雞γ干擾素蛋白的生產方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410771866.2
• 申請日: 2014-12-11
• 公開（公告）號: CN104450731A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發(fā)明（設計）人: 劉新文;胡瀟;鄒敏;郭偉偉;宮曉
• 申請（專利權）人: 青島易邦生物工程有限公司
• 主分類號: C12N15/23
• 分類號: C12N15/23;C12N15/11;C12N15/70;C12N1/21;C07K14/57
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發(fā)明屬于重組蛋白表達技術領域，具體涉及一種可溶性雞γ干擾素蛋白的生產方法。

背景技術

干擾素是一類由T淋巴細胞和NK細胞產生的低分子可溶性多功能糖蛋白，能增強細胞毒性T細胞功能，促進B細胞分化和活化，誘導動物細胞產生多種抗病毒、抗腫瘤活性的細胞因子，具有良好的免疫調節(jié)作用(HOU?Y-D.Molecular?virology.Beijing:Xueyuan?Press,1990.)。

雞γ干擾素最早由Issaacs等于1957年利用雞胚絨毛尿囊膜研究流感病毒干擾現(xiàn)象時發(fā)現(xiàn)的，之后得益于生物技術的飛速發(fā)展，雞γ干擾素的生物學研究進入到一個更為深入廣泛的研究階段。近幾年，Digby等國內外學者相繼報道了雞γ干擾素基因序列，在基因克隆、序列分析等方面進行了大量的研究。已有的研究表明，雞γ干擾素開放性閱讀框有495個堿基，編碼19個氨基酸的信號肽和145個氨基酸的成熟蛋白。雞γ干擾素對某些病毒(腺病毒，流感病毒，水皰性口炎病毒等)的生長及繁殖有較強的抑制作用，可作為一種活化機體細胞的抗病毒生物制劑，同時也可作為免疫佐劑提高疫苗的保護效力(Kaiser?P,Wain?H?M,Rothwell?L.Structure?of?the?chicken?interferon-γgene?and?comparison?to?mammalian?homologues.Gene,1998,207(1):25-32；Digby?M?R,Lowenthal?J?W.Cloning?and?expression?of?the?chicken?interferon-gamma?gene.J?IFN?Cyto?Res,1995,15:939-945；Weining?K?C,Schultz?U,Munster?U,et?al.Biological?properties?of?recombinant?chicken?interferon-gamma.Eur?J?Immunol.1996,26:2440-2447；Michalski?W?P,Shiell?B?J,ONeil?TE,et?al.Recombinant?chicken?IFN-gamma?expressed?in?E.coli:analysis?of?C-terminal?truncation?and?effect?on?biologic?activity.J?IFN?Cyto?Res,1999,19:383-392；Yeh?H?Y,Winslow?B?J,Junker?D?E,et?al.In?vitro?effects?of?recombinant?chicken?interferon-gamma?on?immune?cells.J?IFN?Cyto?Res,1999,19:687-691)。

為了更廣泛的利用雞γ-干擾素蛋白，研究者將雞γ-干擾素基因克隆到大腸桿菌中進行表達。但雞γ-干擾素在原核細胞中表達主要是以不可溶的包涵體形式存在，這就需要經(jīng)過復雜的變性、復性過程才能使用。(戴建華,秦愛建,許金俊等.雞γ-干擾素基因的克隆及其在原核和真核系統(tǒng)中的表達[J].中國預防獸醫(yī)學報,2003,25(4):249-253；鮑鳴,仲大蓮等.雞γ-干擾素基因的克隆及原核表達[J].安徽農業(yè)大學學報,2004,31(1):92-95；蔡梅紅,曹瑞兵,周斌等.雞γ-干擾素成熟蛋白基因的表達及其產物抗病毒活性測定,中國病毒學[J],2004,19(1):32-35；史耀旭,關貴全,高金亮黨志勝等.雞γ-干擾素基因的克隆及原核表達[J].中國獸藥雜志,2006,40(7):12-16；吳樹華宮鵬濤等.雞γ-干擾素基因在大腸桿菌中的表達[J].青島農業(yè)大學學報,2009,26(1):8-11.)。而包涵體蛋白沒有生物活性，后續(xù)純化非常復雜，而且在復性過程中很難做到完全復性，很難達到50％的復性。因此，為了滿足對雞γ干擾素的需有，有必要提供一種雞γ干擾素的可溶性表達方法。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供一種可溶性雞γ干擾素蛋白的生產方法，從而可以高效的表達可溶性雞γ干擾素蛋白。

本發(fā)明首先提供一種雞γ干擾素蛋白的基因，該基因經(jīng)過核苷酸突變后，能在大腸桿菌中高效的表達可溶性雞γ干擾素蛋白，該基因的序列為SEQ?ID?NO:1。