[發明專利]一種制備豬偽狂犬病病毒疫苗的方法及疫苗制品

在審

• 申請號: 201410763259.1
• 申請日: 2014-12-12
• 公開（公告）號: CN105727277A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發明（設計）人: 田克恭;孫進忠;王進產;張許科
• 申請（專利權）人: 普萊柯生物工程股份有限公司
• 主分類號: A61K39/245
• 分類號: A61K39/245;A61P31/22
• 代理公司: 北京華夏正合知識產權代理事務所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營

1.一種制備豬偽狂犬病病毒疫苗的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)制備懸浮傳代細胞；

(2)擴增培養所述步驟(1)制備的懸浮傳代細胞；以及

(3)在所述步驟(2)擴增培養后的懸浮傳代細胞接種偽狂犬病病毒，擴增培養偽狂犬病病毒。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，

所述傳代細胞包括BHK-21細胞；

所述偽狂犬病病毒毒株包括偽狂犬病病毒變異株，優選地，所述偽狂犬病病毒毒株包括豬偽狂犬病病毒HN1201株、豬偽狂犬病病毒HN1201株gE基因缺失株及其培養物(5-35代以內)的活的全病毒。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中擴增培養懸浮傳代細胞采用連續放大方式培養，所述連續放大方式中單次培養前懸浮傳代細胞濃度為0.2×10⁶個/ml～2×10⁶個/ml，所述單次培養過程至懸浮傳代細胞濃度為1×10⁶個/ml～10×10⁶個/ml時結束。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中擴增培養懸浮傳代細胞采用連續放大方式培養，所述連續放大方式中單次培養前懸浮傳代細胞濃度為0.6×10⁶個/ml～1×10⁶個/ml，所述單次培養過程至懸浮傳代細胞濃度為3×10⁶～6×10⁶個/ml時結束。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中所述傳代細胞于方瓶中靜止培養，培養2～4d后收集液體中漂浮的活細胞；

所述步驟(2)中用搖瓶或磁力攪拌瓶培養懸浮傳代細胞，搖瓶培養的條件為5％CO₂,37℃，90～100rpm，所述磁力攪拌瓶培養的條件為5％CO₂，37℃，30rpm；或

所述步驟(2)中用生物反應器培養懸浮傳代細胞，所述生物反應器培養參數為pH7.0～7.4,溫度為36～38℃，溶氧(Do)為30％～60％，攪拌速度為50rpm～100rpm。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中所述偽狂犬病病毒接毒劑量為0.0005～5M.O.I，優選為0.005～0.5M.O.I；在所述偽狂犬病病毒接種24h～72h后(或細胞病變80％后)收獲病毒液。

7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中采用連續放大方式擴增培養懸浮傳代細胞為灌流和流加連續培養。

8.一種根據權利要求1-7任一項所述方法制備的豬偽狂犬病病毒疫苗。

9.根據權利要求8所述的豬偽狂犬病病毒疫苗，所述豬偽狂犬病病毒疫苗含量為滅活前10^10.0TCID₅₀/ml。