[發明專利]抗腫瘤藥物篩選試劑盒及其使用方法

有效

• 申請號: 201410758566.0
• 申請日: 2014-12-09
• 公開（公告）號: CN105738329B
• 公開（公告）日: 2019-05-07
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 費好義
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種抗腫瘤藥物篩選試劑盒，所述的腫瘤是由ras原癌基因過表達引起的，所述的試劑盒包括如下材料：

①秀麗隱桿線蟲野生型N2；

②秀麗隱桿線蟲突變體MT2124；

③秀麗隱桿線蟲CB1275；

④NGM培養基；

⑤大腸桿菌OP50；

⑥染料：2’，7’-二氯二氫熒光素二乙酯。

2.根據權利要求1所述的抗腫瘤藥物篩選試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒所用的秀麗隱桿線蟲為同步化后的線蟲，線蟲同步化的步驟為：

①挑選成熟的秀麗隱桿線蟲至裝有1ml M9液的離心管中，4000rpm離心5分鐘，去上清；

②向離心管中加入500μL 1 M氫氧化鈉，500μL 6.4％(V/V)次氯酸鈉，震蕩裂解；

③去掉上清，向沉淀中加入1.5μLM9液，搖勻，4000rpm離心5分鐘，重復該步驟三次：

④向洗凈的卵中加入500μLM9液，18℃24小時孵化成L1期秀麗隱桿線蟲。

3.根據權利要求1所述的抗腫瘤藥物篩選試劑盒，其特征在于，所述的秀麗隱桿線蟲的濃度為100條/20μL。

4.如權利要求2所述的抗腫瘤藥物篩選試劑盒的使用方法，其特征在于，所述試劑盒的使用方法為：

①秀麗隱桿線蟲的染色與檢測

將如權利要求2所述同步化后的L1期秀麗隱桿線蟲MT2124混勻，計數單位液體體積中秀麗隱桿線蟲的數目，備用：在96孔板上取2孔，每個孔中先加入140μL的S液，然后加入20μL大腸桿菌菌體溶液，每個孔中加入90條左右的秀麗隱桿線蟲MT2124，第一個孔為陰性對照，加入20μL蒸餾水，另一個孔加入供試藥物；最后使每個孔的液體體積都是200μL；然后將液體混勻，20℃振蕩培養6天左右，待其發育為成蟲，即產生假陰門后，用M液從平板上沖下，轉移到離心管中，待秀麗隱桿線蟲自然沉淀，除去上清液，留取秀麗隱桿線蟲；加入含0.05％(V/V)的吐溫20的M9液，待秀麗隱桿線蟲自然沉淀，除去上清液，留取秀麗隱桿線蟲：再用純凈的M9液洗滌至澄清，轉移秀麗隱桿線蟲到新的96孔板上，加樣位置與原來96板對應，每個孔做三個平行對照，加入染料，分別染色，染色后的秀麗隱桿線蟲在熒光顯微鏡下觀察，拍照；并且利用熒光酶標儀檢測熒光值，激發光波長485nm，發射光波長535nm；

②將實驗數據進行處理，測量染色后的線蟲熒光強度。

5.根據權利要求4所述的抗腫瘤藥物篩選試劑盒的使用方法，其特征在于，所述的秀麗隱桿線蟲用染料染色時，染料終濃度為50μg/mL。

6.根據權利要求4所述的抗腫瘤藥物篩選試劑盒的使用方法，其特征在于，所述的秀麗隱桿線蟲用染料染色時，染色時間為1.5小時。

7.根據權利要求4所述的抗腫瘤藥物篩選試劑盒的使用方法，其特征在于，所述的秀麗隱桿線蟲用染料染色時，染色溫度20℃。