[發明專利]一種維生素B12在線免疫親和凈化柱及其使用方法

在審

• 申請號: 201410758483.1
• 申請日: 2014-12-11
• 公開（公告）號: CN104458976A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 趙孔祥;何佳;宓捷波;陳旭艷;鄭文杰
• 申請（專利權）人: 天津出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心
• 主分類號: G01N30/14
• 分類號: G01N30/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于維生素檢測技術領域，特別是涉及一種維生素B12在線免疫親和凈化柱及其使用方法。

背景技術

目前，免疫親和層析是一種利用抗原抗體特異性可逆結合特性的SPE技術,根據抗原抗體的高選擇性,從復雜的待測樣品中提取目標化合物。它具有高選擇性及高親和性，目前，在真菌毒素、獸藥殘留、微量維生素分析中作為前處理凈化手段應用越來越廣泛。但是由于商品化的免疫親和凈化柱只能使用一次，且價格較高，阻礙了其在實際檢測工作的使用?，F有的檢測方法存在檢測成本高，手工操作，檢測時間長，檢測效率低等技術問題。

發明內容

本發明為解決公知技術中存在的技術問題而提供一種B12在線免疫親和凈化柱及其使用方法。

本發明提供一種B12在線免疫親和凈化柱，該凈化色譜柱不僅能重復使用，而且通過與液相色譜或液相色譜-串聯質譜的聯用，實現樣品的凈化、分析的自動化。

本發明能在線、重復使用，可凈化維生素B12。將該免疫親和凈化柱通過閥切換連接到具有雙泵的液相色譜儀或液相色譜-串聯質譜儀上，通過上樣、轉移和分析與平衡等步驟實現維生素B12的在線免疫親和凈化測定。

本發明的目的之一是提供一種具有免疫親和凈化柱可以多次使用，降低檢測費用，縮短了檢測時間，簡化了檢測步驟等特點的B12在線免疫親和柱。

本發明B12在線免疫親和凈化柱所采取的技術方案是：

一種B12在線免疫親和凈化柱，其特點是：免疫親和柱中裝填偶聯有B12抗體的瓊脂糖凝膠，兩端有密封篩板。

本發明B12在線免疫親和凈化柱還可以采用如下技術方案：

所述的B12在線免疫親和凈化柱，其特點是：免疫親和柱為圓柱形不銹鋼填充柱，圓柱形不銹鋼填充柱直徑為2－6mm，長度為20－30mm。

所述的B12在線免疫親和凈化柱，其特點是：圓柱形不銹鋼填充柱裝有雙液相泵的液相色譜儀或液相色譜-串聯質譜儀及連接閥。

所述的B12在線免疫親和凈化柱，其特點是：雙液相泵為凈化泵和洗脫泵，凈化泵為免疫親和柱輸送液體，洗脫泵為分析柱輸送液體。

本發明的目的之二是提供一種具有操作方便，降低檢測費用，手動凈化方式改為自動凈化，節省了人力，縮短了檢測時間，簡化了檢測步驟，檢測效率高等特點的B12在線免疫親和凈化柱的使用方法。

本發明B12在線免疫親和凈化柱的使用方法所采取的技術方案是：

一種B12在線免疫親和凈化柱的使用方法，其特征是：B12在線免疫親和凈化柱一端連接凈化泵，另一端連接六通閥，洗脫泵與六通閥連通，六通閥連通分析柱，分析柱連接檢測儀，切換六通閥實現免疫親和凈化柱與分析柱的串聯或并聯；其使用過程包括以下步驟：

(1)上樣：六通閥使免疫親和凈化柱與分析柱獨立，凈化泵提供磷酸鹽緩沖液，含有B12的樣品提取液被帶入免疫親和，B12被吸附，雜質被吸附而隨上樣液進入廢液；分析柱處于初始流動相平衡階段；

(2)轉移：通過六通閥切換，免疫親和凈化柱與分析柱串聯使用，凈化泵提供乙腈/水，免疫親和柱上富集的B12隨洗脫液進入分析柱；

(3)分析與平衡：免疫親和凈化柱通過凈化泵依次提供的乙腈、磷酸鹽緩沖液進行沖洗與平衡，為下一個樣品分析做準備；分析柱通過洗脫泵提供的梯度洗脫溶液，將B12分離并帶入檢測儀，實現B12的檢測。

本發明B12在線免疫親和凈化柱的使用方法還可以采用如下技術方案：

所述的B12在線免疫親和凈化柱的使用方法，其特點是：檢測儀為液相色譜檢測儀或串聯質譜檢測儀。

所述的B12在線免疫親和凈化柱的使用方法，其特點是：上樣及平衡溶液為pH?7.2至pH?7.6的磷酸鹽緩沖液，流速1.8－2.2mL/min。

所述的B12在線免疫親和凈化柱的使用方法，其特點是：轉移溶劑為體積比為1：1的乙腈/水，轉移流速0.4－0.8mL/min，轉移時間3－5min。

所述的B12在線免疫親和凈化柱的使用方法，其特點是：分析柱為4.6mm*100mm粒徑為3μm的C18填料的色譜柱，操作條件采用甲醇-0.1％甲酸水溶液梯度洗脫，流速為0.5－0.7mL/min。

本發明具有的優點和積極效果是：