[發明專利]一種具有粘膜免疫佐劑活性的多肽及其在制備粘膜免疫佐劑中的用途

有效

• 申請號: 201410756373.1
• 申請日: 2014-12-10
• 公開（公告）號: CN104402974B
• 公開（公告）日: 2017-11-14
• 發明（設計）人: 馬永平
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;A61K39/39;A61P37/04
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙)51222
• 代理人: 李高峽,張娟

技術領域

本發明涉及免疫學、預防醫學領域，具體涉及一種具有粘膜免疫佐劑活性的多肽及其在制備粘膜免疫佐劑中的用途。

背景技術

粘膜免疫系統(mucosal immune system,MIS)是全身免疫系統的重要組成部分，包括腸粘膜相關淋巴組織、鼻咽粘膜相關淋巴組織、泌尿生殖道粘膜相關淋巴組織等，作為機體免疫屏障的第一道防線，MIS可有效抵抗各種微生物的入侵。與皮下或肌肉注射免疫相比，粘膜免疫比傳統的免疫方式更具有優勢。首先是免疫途徑的差異，粘膜免疫主要采用口服、滴鼻或生殖道接種的方法，這種新型的免疫方式可避免針劑對機體刺激，減少針尖對皮膚損傷引起的炎癥反應，且可多次重復接種。其次在機體的生殖道、消化道等部位廣泛存在有共同粘膜免疫組織，基于此，如果某個部位的粘膜組織發生抗原提呈后產生的免疫反應通常可以刺激誘導較遠的粘膜免疫應答。研究發現，粘膜免疫不僅能誘導粘膜組織分泌特異性sIgA中和表面毒素，還能同時誘導體液免疫應答，產生針對抗原的特異性抗體。

鼻粘膜的淋巴組織主要由雙側咽峽管、雙側咽淋巴環、鼻咽扁桃體、腭扁等結構組成，統稱為鼻粘膜相關淋巴組織(nasal mucosal-associated lymphoid tissue，NALT)。NALT中定居有樹突細胞、淋巴細胞、巨噬細胞和M細胞等免疫細胞。研究表明，NALT是誘導局部和廣泛粘膜免疫應答的重要組成部分。鼻腔免疫是一種方便高效的免疫方法。鼻腔粘膜免疫的優勢在于：(1)鼻腔中蛋白酶含量較少，鼻腔免疫抗原需求量少，佐劑量小；(2)無酸性環境和酶對疫苗產生影響；(3)鼻腔免疫操作簡單,不需購買專門器械,而且可避免注射引起病菌感染，特別是對于群聚人群來講，此種免疫方法可增加建立群體免疫的機會。另外，鼻腔免疫可誘導體液免疫和細胞免疫，并引起廣泛的粘膜免疫應答。

目前報道的鼻粘膜免疫的佐劑主要為細菌毒素，如，大腸桿菌不耐熱腸毒素(heat-labile enterotoxin,LT)和霍亂毒素(cholera toxin，CT)是有效的粘膜免疫佐劑。但他們存在的毒性限制了臨床應用例如，美國于2003年上市的一種流感疫苗以LT為佐劑，接種后中發現其可產生貝爾麻痹等嚴重副作用而停止使用。

為了避免毒性，人們試圖將CT和LT的B亞單位用做佐劑，不過，由于LTB和CTB都含有100多個氨基酸，分子量較大，只能通過基因工程生產，工藝復雜，制備成本高。而且，由于對其安全性的擔憂，FDA至今沒有批準用于臨床。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種新的具有粘膜免疫佐劑活性的小分子多肽及其用途。

本發明多肽，它的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本發明還提供了前述多肽在制備免疫佐劑中的用途。

其中，所述免疫佐劑是具有粘膜免疫佐劑活性的佐劑。

本發明還提供了一種免疫佐劑，它是氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的多肽，加上藥學上可接受的輔助形成分制備而成的制劑。

發明人偶然發現本發明小分子多肽，其僅僅含有8個氨基酸，分子量約880Da，遠遠小于LTB和CTB，然而，其粘膜免疫佐劑活性卻與大分子LTB相當，取得了意料不到的技術效果。

同時，本發明小分子多肽無毒副作用，安全有效，可以和目前廣泛使用的疫苗抗原聯合應用，并且，由于是小分子肽，可以自動化合成，性能更加穩定，質量容易控制，人用安全性高，成本低廉。

綜上，本發明小分子多肽安全、有效、穩定、可控，有望用于人體，臨床應用前景良好。

以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發明的上述內容作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實施例。凡基于本發明上述內容所實現的技術均屬于本發明的范圍。

附圖說明

圖1本發明中粘膜免疫佐劑活性及其量效關系檢測結果，所測樣本為血清中的EVP1特異性抗體滴度，EVP1組與EVP1+PT10，EVP1+PT20組間差異顯著(p<0.05)。PT代表本發明的粘膜免疫佐劑多肽。數字代表多肽含量(μg/只)。

圖2本發明中粘膜免疫佐劑活性與LTB比較的檢測結果，所測樣本為血清中的EVP1特異性抗體滴度，EVP1組與EVP1+PT，EVP1+LTB組間差異顯著(p<0.05)。EVP1+PT，與EVP1+LTB組間在24日的數據差異不顯著(p>0.05)，PT代表本發明的粘膜免疫佐劑多肽。