[發(fā)明專利]用熒光免疫層析技術(shù)檢測犬瘟熱病毒的試紙條和方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410753886.7
• 申請日: 2014-12-11
• 公開（公告）號: CN105738620A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊揮
• 申請（專利權(quán)）人: 楊揮
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及納米材料技術(shù)、免疫學(xué)技術(shù)、側(cè)流層析技術(shù)等領(lǐng)域。更具體的，本發(fā)明涉及一種用熒光免疫層析技術(shù)檢測犬瘟熱病毒的試紙條；此外，本發(fā)明還涉及一種用熒光免疫層析技術(shù)來檢測犬瘟熱病毒的方法。

背景技術(shù)

犬瘟熱病毒主要感染犬科動物，感染后癥狀主要局限于上呼吸道，所以會咳嗽、流鼻涕，未經(jīng)免疫的幼犬很可能出現(xiàn)嚴(yán)重癥狀，如肺炎、腹瀉、脫水、厭食等，很容易死亡。

如果犬感染了犬瘟熱病毒，需要盡早檢測并及早治療。檢測犬瘟熱病毒的傳統(tǒng)方法是膠體金免疫層析法，但是膠體金免疫層析靈敏度較低，穩(wěn)定性也不夠好，容易出現(xiàn)假陰假陽。我公司開發(fā)的熒光免疫層析法檢測犬瘟熱病毒的試劑盒靈敏度很高，可檢測到10ng/ml的犬瘟熱病毒抗原，對犬瘟熱病毒感染的犬能早檢出早隔離早治療，提高幼犬的成活率，同時(shí)因?yàn)殪`敏度提高，極大地減少了假陰假陽的出現(xiàn)，提高了產(chǎn)品的穩(wěn)定性，因此具有重要的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在解決本領(lǐng)域中的上述各種問題和實(shí)現(xiàn)以下目標(biāo)。具體地，本發(fā)明的目的就是要提供一種方便、快速而且高靈敏度的地檢測犬瘟熱病毒的試紙條和方法。

具體的，本發(fā)明提供了一種用熒光免疫層析技術(shù)檢測犬瘟熱病毒的試紙條。

在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種用熒光免疫層析技術(shù)檢測犬瘟熱病毒的試紙條，包括標(biāo)記物墊和捕獲膜，其特征在于，所述標(biāo)記物墊含有熒光微球標(biāo)記的犬瘟熱病毒檢測抗體，所述捕獲膜含有捕獲探針。

在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述熒光微球是時(shí)間分辨熒光微球。

在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述時(shí)間分辨熒光微球是含銪復(fù)合物的熒光微球。

在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種用熒光免疫層析技術(shù)檢測犬瘟熱病毒的方法，其特征在于，在所述的試紙條樣品墊上滴加含犬瘟熱病毒的樣品，反應(yīng)后檢測熒光信號。

在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種用熒光免疫層析技術(shù)檢測犬瘟熱病毒的試劑盒，包含試劑瓶和試紙條，其中試紙條又包含標(biāo)記物墊和捕獲膜，其特征在于，所述試劑瓶含有熒光微球標(biāo)記的犬瘟熱病毒檢測抗體，所述捕獲膜含有捕獲探針。

在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，其特征在于，所述熒光微球是時(shí)間分辨熒光微球。

在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種用熒光免疫層析技術(shù)檢測犬瘟熱病毒的方法，其特征在于，在所述的試劑瓶中加入含犬瘟熱病毒的樣品，混合后滴加到試紙條樣品墊上，反應(yīng)后檢測熒光信號。

詳細(xì)說明

用熒光免疫層析技術(shù)檢測犬瘟熱病毒的試紙條如圖1示，包括樣品墊1，標(biāo)記物墊2，NC膜3，吸水紙4，PVC底板5。NC膜3上含有C線6和T線7。

其中樣品墊一般為玻璃纖維、濾紙或?yàn)V血膜。標(biāo)記物墊可為玻璃纖維、濾紙或聚酯膜。當(dāng)樣品墊和標(biāo)記物墊材質(zhì)相同時(shí)可整合在一起，用一條玻璃纖維、濾紙或聚酯膜來完成樣品墊和標(biāo)記物墊的功能。

所述標(biāo)記物墊上或者含有熒光微球標(biāo)記的犬瘟熱病毒檢測抗體，或者同時(shí)含有熒光微球標(biāo)記的犬瘟熱病毒檢測抗體和生物素標(biāo)記的犬瘟熱病毒捕獲抗體，還可以含有其他用作陽性對照的熒光微球標(biāo)記的犬瘟熱病毒或抗體，如鏈親和素或兔抗體。如果試劑盒中有試劑瓶，則標(biāo)記物墊可以僅僅是玻璃纖維、濾紙或聚酯膜而不含熒光微球或抗體。

捕獲膜可以是硝酸纖維素膜（NC膜）、尼龍膜等，所述捕獲膜的T線或者含有犬瘟熱病毒捕獲抗體（雙抗體夾心法），或者含鏈親和素（標(biāo)記物墊同時(shí)含熒光微球標(biāo)記的犬瘟熱病毒檢測抗體和生物素標(biāo)記的犬瘟熱病毒捕獲抗體），C線或者含有能結(jié)合犬瘟熱病毒檢測抗體的二抗，或者含生物素標(biāo)記的牛血清白犬瘟熱病毒或卵清犬瘟熱病毒（標(biāo)記物墊含鏈親和素），或者含羊抗兔抗體（標(biāo)記物墊含兔抗體）。

用免疫層析技術(shù)檢測犬瘟熱病毒的方法，如圖1示，當(dāng)樣品溶液滴加到試紙條的樣品墊1上后，液體將沿水平箭頭方向移動，先到達(dá)標(biāo)記物墊2，樣品中的犬瘟熱病毒與標(biāo)記物墊2中熒光微球標(biāo)記的犬瘟熱病毒檢測抗體結(jié)合形成‘犬瘟熱病毒-犬瘟熱病毒檢測抗體-熒光微球’復(fù)合物，當(dāng)溶液繼續(xù)移動到達(dá)捕獲膜的T線時(shí)，溶液中的‘犬瘟熱病毒-犬瘟熱病毒檢測抗體～熒光微球’將與此處的犬瘟熱病毒捕獲抗體形成‘犬瘟熱病毒捕獲抗體-犬瘟熱病毒-犬瘟熱病毒檢測抗體～熒光微球’復(fù)合物并被固定在T線上，隨后用檢測儀來檢測T線上的熒光信號，根據(jù)信號強(qiáng)度可以判斷犬瘟熱病毒濃度的高低，熒光信號強(qiáng)則犬瘟熱病毒濃度高。