[發明專利]用熒光免疫層析技術檢測犬冠狀病毒的試紙條和方法

在審

• 申請號: 201410753855.1
• 申請日: 2014-12-11
• 公開（公告）號: CN105738619A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發明（設計）人: 楊揮
• 申請（專利權）人: 楊揮
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及納米材料技術、免疫學技術、側流層析技術等領域。更具體的，本發明涉及一種用熒光免疫層析技術檢測犬冠狀病毒的試紙條；此外，本發明還涉及一種用熒光免疫層析技術來檢測犬冠狀病毒的方法。

背景技術

犬冠狀病毒可感染不同品種和年齡的狗，幼犬尤其嚴重。感染的狗會出現胃腸炎癥狀，頻繁地嘔吐、腹瀉、厭食、沉郁，伴隨白細胞減少，迅速脫水，甚至死亡。有時癥狀消失后14-21天會復發，嚴重危害犬類的健康。

如果犬感染了犬冠狀病毒，需要盡早檢測并及早治療。檢測犬冠狀病毒的傳統方法是膠體金免疫層析法，但是膠體金免疫層析靈敏度較低，穩定性也不夠好，容易出現假陰假陽。我公司開發的熒光免疫層析法檢測犬冠狀病毒的試劑盒靈敏度很高，可檢測到10ng/ml的犬冠狀病毒抗原，對犬冠狀病毒感染的犬能早檢出早隔離早治療，提高幼犬的成活率，同時因為靈敏度提高，極大地減少了假陰假陽的出現，提高了產品的穩定性，因此具有重要的應用前景。

發明內容

本發明旨在解決本領域中的上述各種問題和實現以下目標。具體地，本發明的目的就是要提供一種方便、快速而且高靈敏度的地檢測犬冠狀病毒的試紙條和方法。

具體的，本發明提供了一種用熒光免疫層析技術檢測犬冠狀病毒的試紙條。

在一種實施方式中，本發明提供了一種用熒光免疫層析技術檢測犬冠狀病毒的試紙條，包括標記物墊和捕獲膜，其特征在于，所述標記物墊含有熒光微球標記的犬冠狀病毒檢測抗體，所述捕獲膜含有捕獲探針。

在進一步的實施方式中，其特征在于，所述熒光微球是時間分辨熒光微球。

在進一步的實施方式中，其特征在于，所述時間分辨熒光微球是含銪復合物的熒光微球。

在另一種實施方式中，本發明提供了一種用熒光免疫層析技術檢測犬冠狀病毒的方法，其特征在于，在所述的試紙條樣品墊上滴加含犬冠狀病毒的樣品，反應后檢測熒光信號。

在另一種實施方式中，本發明提供了一種用熒光免疫層析技術檢測犬冠狀病毒的試劑盒，包含試劑瓶和試紙條，其中試紙條又包含標記物墊和捕獲膜，其特征在于，所述試劑瓶含有熒光微球標記的犬冠狀病毒檢測抗體，所述捕獲膜含有捕獲探針。

在進一步的實施方式中，其特征在于，所述熒光微球是時間分辨熒光微球。

在另一種實施方式中，本發明提供了一種用熒光免疫層析技術檢測犬冠狀病毒的方法，其特征在于，在所述的試劑瓶中加入含犬冠狀病毒的樣品，混合后滴加到試紙條樣品墊上，反應后檢測熒光信號。

詳細說明

用熒光免疫層析技術檢測犬冠狀病毒的試紙條如圖1示，包括樣品墊1，標記物墊2，NC膜3，吸水紙4，PVC底板5。NC膜3上含有C線6和T線7。

其中樣品墊一般為玻璃纖維、濾紙或濾血膜。標記物墊可為玻璃纖維、濾紙或聚酯膜。當樣品墊和標記物墊材質相同時可整合在一起，用一條玻璃纖維、濾紙或聚酯膜來完成樣品墊和標記物墊的功能。

所述標記物墊上或者含有熒光微球標記的犬冠狀病毒檢測抗體，或者同時含有熒光微球標記的犬冠狀病毒檢測抗體和生物素標記的犬冠狀病毒捕獲抗體，還可以含有其他用作陽性對照的熒光微球標記的犬冠狀病毒或抗體，如鏈親和素或兔抗體。如果試劑盒中有試劑瓶，則標記物墊可以僅僅是玻璃纖維、濾紙或聚酯膜而不含熒光微球或抗體。

捕獲膜可以是硝酸纖維素膜（NC膜）、尼龍膜等，所述捕獲膜的T線或者含有犬冠狀病毒捕獲抗體（雙抗體夾心法），或者含鏈親和素（標記物墊同時含熒光微球標記的犬冠狀病毒檢測抗體和生物素標記的犬冠狀病毒捕獲抗體），C線或者含有能結合犬冠狀病毒檢測抗體的二抗，或者含生物素標記的牛血清白犬冠狀病毒或卵清犬冠狀病毒（標記物墊含鏈親和素），或者含羊抗兔抗體（標記物墊含兔抗體）。

用免疫層析技術檢測犬冠狀病毒的方法，如圖1示，當樣品溶液滴加到試紙條的樣品墊1上后，液體將沿水平箭頭方向移動，先到達標記物墊2，樣品中的犬冠狀病毒與標記物墊2中熒光微球標記的犬冠狀病毒檢測抗體結合形成‘犬冠狀病毒-犬冠狀病毒檢測抗體-熒光微球’復合物，當溶液繼續移動到達捕獲膜的T線時，溶液中的‘犬冠狀病毒-犬冠狀病毒檢測抗體～熒光微球’將與此處的犬冠狀病毒捕獲抗體形成‘犬冠狀病毒捕獲抗體-犬冠狀病毒-犬冠狀病毒檢測抗體～熒光微球’復合物并被固定在T線上，隨后用檢測儀來檢測T線上的熒光信號，根據信號強度可以判斷犬冠狀病毒濃度的高低，熒光信號強則犬冠狀病毒濃度高。