[發明專利]關節鏡沖洗液來源間充質干細胞在再生修復中應用

在審

• 申請號: 201410753662.6
• 申請日: 2014-12-09
• 公開（公告）號: CN104771413A
• 公開（公告）日: 2015-07-15
• 發明（設計）人: 周治宇
• 申請（專利權）人: 周治宇
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61P19/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.本發明提供關節鏡沖洗液來源間充質干細胞在再生修復中應用，步驟包括：

(1)關節液收集：用無菌的收集管對關節鏡手術過程中沖洗液進行分段收集沖洗液，保存備用；

(2)干細胞分離制備：將分段收集沖洗液通過陶瓷膜過濾，進行細胞富集，所得細胞分別加入培養液后重新懸浮，按3×10⁵/ml濃度接種到培養瓶及事先放置有消毒蓋玻片的12孔板中傳代培養，培養液為含15％FBS的L-DMEM培養液，培養5～7d去除未貼壁的細胞后，獲得貼壁細胞；

(3)合格供體材料檔案：參照國際間充質干細胞標準對貼壁細胞進行純度和均一性的鑒定分析，確定合格的間充質干細胞，建立相關檔案，同時對合格的干細胞進行傳代，4～5d傳代一次；

(4)間充質干細胞的成軟骨分化：將培養傳代3次以上的干細胞，制成濃度為4×10⁵/ml的懸液，取1ml細胞懸液于15m1塑料離心管中，500g離心15min，使其形成細胞微團，小心吸去培養液，加入2ml無血清軟骨誘導培養液，然后置于二氧化碳培養箱中培養，4天后首次換液，以后隔2天換液，在培養21天后取出培養的細胞團，檢測成軟骨分化效果；

(5)植入再生修復效果：將合格的間充質干細胞按一定濃度植入患者關節處，觀察關節再生修復效果。

2.根據權利要求1的方法，其中步驟(1)所述保存條件是在無菌條件下，4℃儲存小于4小時，運輸過程中維持在4℃環境下。

3.根據權利要求1的方法，其中步聚(2)和(4)中所述細胞培養環境條件為37℃、5％CO₂、飽和濕度的二氧化碳培養箱中培養。

4.根據權利要求1的方法，其中步聚(4)中所述無血清軟骨誘導培養液是指高糖DMEM(H-DMEM)含TGF-β11ng/mL、地塞米松10^－7mmol/L、維生素C50mg/L，胰島素6.25ng/L，轉鐵蛋白6.25ug/mL，牛血清白蛋白1.25ug/mL。

5.根據權利要求1的方法，其中步聚(5)中所述植入干細胞濃度在50～4×10⁷/ml。