[發明專利]一株產幾丁質酶的粘質沙雷氏菌誘變菌株S68-CM5

有效

• 申請號: 201410753528.6
• 申請日: 2014-12-10
• 公開（公告）號: CN104531564A
• 公開（公告）日: 2015-04-22
• 發明（設計）人: 胡基華;陳靜宇;姜威;孟利強;曹旭;劉宇帥;李晶;張淑梅
• 申請（專利權）人: 黑龍江省科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N13/00;C12N15/01;C12R1/43
• 代理公司: 哈爾濱市偉晨專利代理事務所(普通合伙) 23209
• 代理人: 張金珠

技術領域

本發明涉及一株粘質沙雷氏菌誘變菌株。

背景技術

粘質沙雷氏菌(Serratia?marcescens)亦稱靈桿菌，是革蘭氏陰性兼性厭氧桿菌，屬于腸桿菌科克白雷氏菌族中的沙雷氏菌屬，為該屬的代表菌種多存在于沿海鹽堿土壤中，能產生紅色非擴散性色素一靈菌紅素(Prodigiosin)。靈菌紅素具有抗菌、抑癌、提高免疫力等生理活性，20世紀70年代國外學者對靈菌紅素的提取、分離純化，生物合成及其特性作了許多研究。國內學者對粘質沙雷氏菌抗原寡糖片段的合成和細菌胞內自由氨基酸庫含量和組成進行了研究，但對其在植物上的應用研究較少。直至90年代初期美國奧爾本大學Press等發現了粘質沙雷氏菌可誘導煙草、黃瓜等植物產生抗性和抵抗多種病原物的侵襲以后，世界上才開始對其在植物上的應用進行研究。郭堅華等研究表明，在溫室和田間小區試驗中沙雷氏菌均表現出對辣椒青枯病的有效生物防治作用。陳秀為等從棉田中自然死亡的棉鈴蟲體上分離到一株粘質沙雷氏菌，經實驗研究，該菌對棉鈴蟲、菜青蟲、甜菜夜蛾具有明顯的致病力。

幾丁質(Chitin)又稱甲殼素或甲殼質，是由N-乙酞-D-葡萄糖胺(NAG)通過p-1,4糖酣鍵聚合而成的直鏈型天然生物多糖，其廣泛分布于自然界中，是含量僅次于纖維素的生物高分子物質。除蛋白質外，它還是地球上數量最大的天然含氮有機化合物幾丁質酶具有多種用途，廣泛應用予植物病原真菌的生物防治、功能性幾丁寡糖的制備，抗病基因工程中的基因資源應用等領域。幾丁質酶存在于各種微生物、植物、動物的組織內，尤其廣泛分布于各種微生物中包括細菌、放線菌和真菌共約有46個屬近70種都能產生幾丁質酶。至目前為止,對幾丁質酶的研究己涉及到酶的分布！特性！定位！誘導！分子生物學和基因工程等方面。幾丁質酶還具有其它多種生理功能。Minic?et?al研究表明，幾丁質酶可以降解固氮菌產生的結瘤因子，從而控制結瘤因子水平，使植物與根瘤菌達到共生平衡，參與共生固氮調控。stangarlinetal的研究表明：幾丁質酶廣泛參與了植物光合作用等過程，這些研究均暗示著幾丁質酶具有多種生理功能，可應用領域十分廣泛。

發明內容

本發明提供一株沙雷氏菌誘變菌株。

本發明粘質沙雷氏菌誘變菌株S68-CM5保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏日期為2014年11月14日，保藏編號為CGMCC?No.9973。

本發明粘質沙雷氏菌誘變菌株S68-CM5為革蘭氏陰性短小桿菌(0.6-1.0×0.5u)，也有呈球狀的，單個或排列成短鏈，每鏈3-6個細胞，有鞭毛，能運動，無芽孢，無莢膜。在營養瓊脂平板上，菌落小，有粘性，中央呈顆粒狀或光滑，有惡臭，產生暗紅色或鮮紅色色素。

生化反應：強度液化明膠；牛乳凝固，產酸而不能胨化；分解葡萄糖，產酸；還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。

本發明粘質沙雷氏菌誘變菌株S68-CM5可以在Smith合成培養基、牛肉膏蛋白胨培養基和甘露醇培養基中生長，其特點是具有較高的幾丁質酶活力。

Smith合成培養基：C₆H₈O₇·H₂O?22g/L，Na₂SO₄?0.5g/L，葡萄糖44g/L，KH₂PO₄?5.0g/L，MgSO₄·7H₂O?0.8g/L，NaCl?0.04g/L，FeSO₄·7H₂O?0.04g/L，MnSO₄·4H₂O?0.04g/L(pH值7.7)。甘露醇培養基按質量百分含量由1％甘露醇、1.5％牛肉膏、0.25％MgSO₄和水組成(pH值5.0)。

本發明粘質沙雷氏菌誘變菌株S68-CM5的最適發酵條件為25-30℃，搖床150-180轉/min。

本發明的有益效果：

本發明粘質沙雷氏菌誘變菌株S68-CM5在10代以內傳代，基本上保持了遺傳穩定性，即使是第10代依然保持了將近87％的酶活力，與野生菌株相比有顯著提高。

附圖說明

圖1為具體實施方式一中各誘變菌株的幾丁質酶活力圖；圖2為具體實施方式一中誘變株CM5傳代培養10代幾丁質酶活力圖。

具體實施方式