[發明專利]一種表達雞傳染性法氏囊可溶性VP 2-4-3多肽的方法

有效

• 申請號: 201410753079.5
• 申請日: 2014-12-09
• 公開（公告）號: CN104513298B
• 公開（公告）日: 2018-07-17
• 發明（設計）人: 李明義;高江明;劉陽;馮晶晶;單學強;張倫;趙航;李佳琪;孫化露
• 申請（專利權）人: 山東信得科技股份有限公司
• 主分類號: C07K14/08
• 分類號: C07K14/08;C12N15/40;C12N15/70;C12N1/21;C12P21/02;A61K39/12;A61P31/14
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發明的目的是提供一種表達雞傳染性法氏囊可溶性VP 2?4?3多肽的方法，能夠克服目前雞傳染性法氏囊可溶性VP 2?4?3蛋白重組表達時主要以包涵體方式表達的問題，從而彌補現有技術的不足。本發明提供一種改造的雞傳染性法氏囊VP 2?4?3多肽，其氨基酸序列為SEQ ID NO:1。本發明優化獲得的VP 2?4?3抗原保持了其主要抗原性，且經過了細胞周質的加工和修飾過程，結構上比單純的原核表達的包涵體更接近于原蛋白結構，抗原特異性更強。并且該抗原為分泌表達，抗原純化無需裂解細胞，避免了內毒素的引入回避了內毒素去除程序。該抗原更適于低成本大規模工業化生產。

技術領域

本發明屬于蛋白重組表達技術領域，具體涉及一種表達雞傳染性法氏囊可溶性VP2-4-3多肽的方法。

背景技術

傳染性法氏囊病(infectious bursal disease，IBD)是由傳染性法氏囊病病毒感染，引起幼雞發病的一種急性高度傳染性疾病。該疾病發病率高，病程較短，對養殖業的危害巨大。發病雞主要表現為腹瀉、顫抖、極度虛弱嚴重者引起死亡。而且幼雞感染之后可導致免疫抑制，誘發多種疫苗免疫失效。該病毒為雙鏈RNA病毒，有單層衣殼，無囊膜。IBDV病毒顆粒有五種蛋白構成，其中VP2蛋白可以誘導產生具有保護性的中和抗體，是發展亞單位疫苗的理想抗原。目前臨床上常用IBDV弱毒活疫苗及滅活疫苗進行免疫，應用弱毒活疫苗需準確把握免疫時期，母源抗體水平降低時免疫，過早免疫效果不佳，已被中和，免疫時期延后，由于其免疫抑制影響其他疫病免疫接種。滅活苗不利與長期維持較高抗體水平。發展VP2蛋白的重組疫苗可以很好地解決傳染性法氏囊病免疫抑制問題，但目前原核表達VP2抗原多以包涵體的形式存在，導致獲得蛋白的量達不到要求，且免疫效果欠佳。

發明內容

本發明的目的是提供一種表達雞傳染性法氏囊可溶性VP 2-4-3多肽的方法，能夠克服目前雞傳染性法氏囊可溶性VP 2-4-3蛋白重組表達時主要以包涵體方式表達的問題，從而彌補現有技術的不足。

本發明首先提供一種改造的雞傳染性法氏囊VP 2-4-3多肽，其氨基酸序列為SEQID NO:1；

本發明還提供一種編碼上述雞傳染性法氏囊可溶性VP 2-4-3多肽的基因；作為實施例的優選，上述基因的核苷酸序列為SEQ ID NO:2；

本發明還提供一種重組質粒，所述的重組質粒攜帶有上述的基因；

作為優選，上述的重組質粒中，在基因片段的前面來連接有OmpA信號肽。

本發明再一個方面提供生產雞傳染性法氏囊可溶性VP 2-4-3多肽的方法，是用轉化有上述重組質粒的大腸桿菌發酵來制備的；

本發明再提供一種疫苗，所述的疫苗中是用其氨基酸序列為SEQ ID NO:1的雞傳染性法氏囊可溶性VP 2-4-3作為抗原。

本發明優化獲得的的VP 2-4-3抗原保持了其主要抗原性，且經過了細胞周質的加工和修飾過程，結構上比單純的原核表達的包涵體更接近于原蛋白結構，抗原特異性更強。并且該抗原為分泌表達，抗原純化無需裂解細胞，避免了內毒素的引入回避了內毒素去除程序。該抗原更適于低成本大規模工業化生產。

附圖說明

圖1：質粒構建示意圖。

圖2：分泌表達純化后的VP2-4-3多肽PAGE圖；

圖3：以抗傳染性法氏囊病毒抗血清為抗體識別VP2-4-3多肽抗原的Westernblotting圖。

具體實施方式