[發(fā)明專利]一種重組谷氨酸生產(chǎn)菌株及其制備方法與應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410752942.5
• 申請日: 2014-12-10
• 公開（公告）號: CN105734002B
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發(fā)明（設計）人: 梁恒宇;王宏齡;王曉建;臧傳剛;林海龍;韓雋;朱威宇
• 申請（專利權）人: 中糧集團有限公司;中糧營養(yǎng)健康研究院有限公司;中糧生化能源（龍江）有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P13/14;C12R1/15
• 代理公司: 北京潤平知識產(chǎn)權代理有限公司 11283
• 代理人: 李婉婉;金迪

1.一種制備重組谷氨酸生產(chǎn)菌株的方法，其特征在于，該方法包括：

使谷氨酸生產(chǎn)菌株中的基因pitR失活并使非PTS葡萄糖轉運系統(tǒng)基因過量表達，所述非PTS葡萄糖轉運系統(tǒng)基因包括基因iolT1和/或iolT2；或者，

使谷氨酸生產(chǎn)菌株中的基因pitR失活并使非PTS葡萄糖轉運系統(tǒng)基因過量表達，所述非PTS葡萄糖轉運系統(tǒng)基因包括基因iolT1和/或iolT2，并使PTS葡萄糖轉運系統(tǒng)基因失活并使葡萄糖激酶基因過量表達，所述PTS葡萄糖轉運系統(tǒng)基因選自基因ptsI、ptsH或ptsG中的至少一個，所述葡萄糖激酶基因包括基因glk和/或ppgK；

其中，基因pitR為Gene ID：1020455。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述非PTS葡萄糖轉運系統(tǒng)基因為基因iolT1。

3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述PTS葡萄糖轉運系統(tǒng)基因為基因ptsI。

4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述葡萄糖激酶基因為基因glk。

5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述方法包括：使基因pitR失活并使基因iolT1過量表達，使基因ptsI失活并使glk過量表達。

6.根據(jù)權利要求1-5中任意一項所述的方法，其中，使基因失活的方式為同源敲除、移碼突變和反義RNA干擾中的至少一種；使基因過量表達的方式為將攜帶有該基因的表達載體導入谷氨酸生產(chǎn)菌株和/或強化該基因的啟動子。

7.根據(jù)權利要求5所述的方法，其中，使基因pitR失活并使基因iolT1過量表達的方式為：將SEQ ID NO：1所示的序列連接至pK18mobsacB質(zhì)粒的Xba I酶切位點和Hind III酶切位點之間，并將得到的重組質(zhì)粒導入谷氨酸生產(chǎn)菌株；使基因ptsI失活并使glk過量表達所述方法為：將SEQ ID NO：2所示的序列連接至pK18mobsacB質(zhì)粒的Xba I酶切位點和HindIII酶切位點之間，并將得到的重組質(zhì)粒導入谷氨酸生產(chǎn)菌株。

8.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述谷氨酸生產(chǎn)菌株為野生型的谷氨酸棒狀桿菌(Corynebacterium glutamicum)。

9.由權利要求1-8中任意一項所述的方法制備的重組谷氨酸生產(chǎn)菌株。

10.權利要求9所述的重組谷氨酸生產(chǎn)菌株在發(fā)酵產(chǎn)谷氨酸中的應用。