[發明專利]短小芽孢桿菌和蛭弧菌的液體制劑及其應用

在審

• 申請號: 201410751336.1
• 申請日: 2014-12-10
• 公開（公告）號: CN104450576A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 宋增福;許維素
• 申請（專利權）人: 蘇州埃瑞特生物技術有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K1/18;A23K1/17;A23K1/16;C12R1/07;C12R1/01
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 金重慶

技術領域

本發明涉及飼料添加劑技術領域，具體地說，是短小芽孢桿菌和蛭弧菌的液體制劑及其應用。?

背景技術

弧菌屬于弧菌科弧菌屬，是一類革蘭氏陰性、具極生鞭毛、能運動、無芽孢的短桿狀細菌，其中有的弧菌有一定的彎曲，欠柔軟，有的彎曲不明顯?；【呛Ｑ蠹毦膬瀯蓊惾褐?，廣泛分布于世界各地各類河口、內灣、沿岸、水體養殖區和外海的水體及沉積物中，各種海洋生物體表或體內也常生存著高密度海洋弧菌，在海洋環境中占據著重要的生態地位，具有多種多樣的生理、生態功能，在海洋微食物環中扮演重要角色，對海洋的營養物的循環起著非常重要的作用。但同時，弧菌又是水生動物中的一類重要的病原菌。?

隨著高密度海水養殖業快速發展，對養殖環境的污染日益加劇。水產品的病害已成為海水養殖業發展的主要問題?；【∈怯苫【鷮偌毦鸬囊活惣毦约膊。摬≡谌蚍秶鷥葟V泛發生，其爆發性流行不僅給海水養殖魚類、貝類及甲殼類等經濟動物的養殖業造成巨大的經濟損失，還導致野生的海水魚類、貝類及甲殼類的大量死亡?；【∈亲顕乐氐募膊≈?，其死亡率甚至高達100％。?

為了控制病害，通常過度使用抗生素類藥物，這不僅造成養殖產品的藥物殘留，而且還提高了病原細菌的耐藥性，引起抗性基因的轉移，導致生態失調。2005年，歐盟已禁止在動物養殖中使用一切非治療性抗生素。因此，尋找抗生素的替代藥物、探索新的防治方式已經迫在眉睫。?

中國專利文獻CN101275119公開了一種蛭弧菌在消除淡水產品及其養殖水體中致病菌的應用，特別適用于消除淡水產品食用或加工前、運輸過程及其養殖水體中攜帶的致病菌。在污染了致病菌的淡水產品養殖水體中、食用前、加工前或運輸過程中加入蛭弧菌濃縮液，使其濃度至少達到10³pfu/ml。淡水產品食用或加工前、運輸過程中或養殖水體中應用該法時，蛭弧菌游泳體濃度范圍分別為10⁵～10¹³pfu/ml；10⁴～10¹²pfu/ml；10³～10⁷pfu/ml。中國專利文獻CN101781627A公開了一種海水蛭弧菌微生態制劑的制備與應用，涉及一種海水微生態制劑，需要提供適合于海水養殖用的蛭弧菌制劑的制備方法。該發?明由以下步驟組成：制備宿主菌懸液；蛭弧菌的分離、純化；蛭弧菌增殖培養，其特征是將施氏假單胞菌接斜面活化后，在試管中加入生理鹽水制得菌懸液，然后用營養肉湯增殖培養，在所得菌液中加入絮凝劑，搖勻后靜置沉淀，加入生理鹽水得到10¹²cfu/mL的宿主菌懸液；用雙層瓊脂平板法對采集的海水和底泥樣品進行蛭弧菌的分離和純化，將含有宿主菌懸液和采集樣品的培養基混勻后倒入下層海水瓊脂上培養，將宿主菌和分離得到的蛭弧菌加入到滅菌天然海水中培養至蛭弧菌濃度為10⁸～10⁹pfu/mL，備用。中國專利文獻CN101948784A公開了一種蛭弧菌制劑及其發酵方法和應用。發酵方法包括以下步驟：(1)宿主菌懸液的制備；(2)蛭弧菌游泳體濃縮液的制備；(3)蛭弧菌制劑的制備。中國專利文獻CN102217655A公開了一種粉狀噬菌蛭弧菌制劑及其制備方法，以沸石粉作為賦形載體，利用噴霧干燥技術制備粉狀噬菌蛭弧菌制劑。中國專利文獻CN102726634A公開了一種海參用微生態飼料及其制備方法，飼料包括噬菌蛭弧菌、枯草芽孢桿菌和輔料；所述噬菌蛭弧菌在微生態飼料中的濃度為10⁶-10¹⁰個/g，所述枯草芽孢桿菌在微生態飼料中的濃度為10⁶-10¹⁰個/g，所述輔料包括氮源、碳源和磷酸鹽。中國專利文獻CN103719535A公開了一種噬菌蛭弧菌微膠囊，所述微膠囊的壁為明膠，顆粒呈球形，表面有凹陷，但沒有孔和裂紋，所述顆粒粒徑大小為3～12μm，分布基本均勻，且其中，噬菌蛭弧菌的含量為3.69×10⁷pfu/g～3.70×10⁷pfu/g，大腸桿菌DH5α的含量為8.6×10⁹pfu/g～2.10×10¹⁰pfu/g。該微膠囊的制備方法，其包括步驟：1)大腸桿菌DH5α菌懸液的制備；2)噬菌蛭弧菌培養液的制備；和3)將步驟1)的大腸桿菌DH5α菌懸液和步驟2)的噬菌蛭弧菌培養液與無菌明膠溶液均勻混合后，進行噴霧干燥，最終制備成微膠囊。中國專利文獻CN103907596A公開了一種蛭弧菌顆粒劑，由植物油、質量濃度為5％-10％的瓊脂和蛭弧菌含量為10¹⁰-10¹¹CFU/mL的菌液按照體積比為3：50：100的比例混合，然后加入質量濃度為2％的羧甲基纖維素鈉并混合均勻，將混合液滴入到質量分數為10％的CaCl₂溶液中固化12h，再將蛭弧菌固化顆粒于-20℃條件下冷凍干燥24h制得的顆粒劑。中國專利文獻CN104099268A公開了一種水產養殖復合微生物菌劑，其包括如下菌劑及其重量份：枯草芽孢桿菌5-10份，地衣芽孢桿菌0.5-4份，巨大芽孢桿菌1-6份，膠質紅假單胞菌0.2-1份，莢膜紅假單胞菌0.5-3份，噬菌蛭弧菌2-8份。中國專利文獻CN101356927公開了一種蛭弧菌在消除海產品及其養殖水體中致病性弧菌的應用，在污染了致病性弧菌的海產品和/或養?殖水體中加入蛭弧菌濃縮液，使蛭弧菌的濃度至少達到10²pfu/ml。海產品食用前、運輸過程以及養殖水體中應用該法時，蛭弧菌濃度范圍分別為10⁴～10¹²pfu/ml、10³～10¹¹pfu/ml、10²～10⁶pfu/ml。?