[發(fā)明專利]抗流感病毒雞卵黃抗體的制備方法及應用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201410738683.0
• 申請日: 2014-12-08
• 公開（公告）號: CN104402995A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發(fā)明（設計）人: 盧曉露;陳文彪
• 申請（專利權）人: 廣東京豪醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C07K16/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種抗流感病毒雞卵黃抗體的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）流感病毒復合免疫抗原的制備：

制備出甲型H1N1流感病毒、甲型H3N2流感病毒和乙型流感病毒，確定其TCID50值，進行病毒滅活；根據病毒的TCID50值，將甲型H1N1流感病毒、甲型H3N2流感病毒和乙型流感病毒分別與0.01mol/L磷酸鹽緩沖液（PBS，pH=7.2）按比例進行稀釋，再取等量的稀釋好的甲型H1N1流感病毒、甲型H3N2流感病毒和乙型流感病毒進行等比例混合均勻，并與弗氏完全佐劑按照1:1（V/V）充分乳化后制得流感病毒復合免疫抗原；

（2）用制得的流感病毒復合免疫抗原對產蛋母雞進行免疫，獲得免疫雞蛋：

取健康適齡的產蛋母雞，在雞雙翅軸骨頭下的臂三角肌、背部等位置用乳化好的復合免疫抗原進行肌肉、皮下多點注射，以使蛋雞產生更好的免疫反應；首次免疫采用弗氏完全佐劑，其余采用弗氏不完全佐劑；首次免疫前收集未免疫蛋作為陰性對照品，21天后免疫第二次，以后每隔21天免疫一次，每次免疫劑量為0.2~1ml/只，共免疫4~6次；用ELISA?跟蹤檢測免疫雞蛋中抗流感病毒雞卵黃抗體的效價，收集高效價免疫雞蛋（1:1024），將每日收集的免疫雞蛋編號，4℃下保存；

（3）提取、純化：將獲得的免疫雞蛋消毒、去除蛋清及蛋黃膜，留取蛋黃部分，通過水稀釋法離心分離獲得水溶性組分，并用聚乙二醇6000或者硅藻土提取獲得抗流感病毒雞卵黃抗體粗品；將粗品用純化水溶解后，進行超濾純化，截留相對分子量30KD~150KD濾液，將超濾截留液進行除菌過濾，再經過超低溫噴霧干燥，制得抗流感病毒雞卵黃抗體成品，4℃保存。

2.根據權利要求1所述的方法制備得到的抗流感病毒雞卵黃抗體的應用，其特征在于應用于制備預防流感的各種消毒噴霧劑、濕巾、免洗洗手液及牙膏等產品。