[發明專利]一種適用大田棉花種植敏感棉蚜檢測鑒別的方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201410738107.6
• 申請日: 2014-12-07
• 公開（公告）號: CN104407125A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發明（設計）人: 劉小寧;劉寧;張學濤;高希武;張東海;李芬;馬紀
• 申請（專利權）人: 新疆大學;劉小寧
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于棉田害蟲檢測技術領域，具體地，本發明涉及一種快速指示棉花主要害蟲棉蚜對化學殺蟲劑啶蟲脒的敏感性測試技術領域，進一步講，本發明涉及一種簡便快速檢測出棉蚜對啶蟲脒藥劑毒性敏感度，安全科學使用藥劑防治棉蚜的技術領域。?

背景技術

棉蚜（Aphis?gossypii?Glover），俗稱膩蟲、蜜蟲、油蟲，屬同翅目，蚜科，蚜屬，是一種世界性害蟲，除西藏外，在全國各地都有發生，其中以黃河流域和西北內陸棉區發生危害較重。棉蚜的寄主范圍廣泛，全世界已知寄主植物74?科285?種，我國已記載113?種，其中，越冬寄主主要為木槿、花椒、石榴、鼠李等，夏季寄主有棉花及瓜類、茄科、豆科、菊科和十字花科植物等。棉蚜的成蚜、若蚜都主要集中在棉葉背面或嫩頭吸食汁液。苗期受害，棉葉卷縮，棉株生長發育緩慢，中部葉片出現油葉，葉表蚜蟲排泄的蜜露常誘發霉菌滋生，嚴重時導致蕾鈴脫落。?

中國是世界上最大的棉花生產國，也是最大的棉花消費國，因此棉花生產對于我國的經濟發展具有重要意義。隨著轉Bt?基因棉花在中國的大面積推廣應用，棉蚜等刺吸性害蟲成為了棉田的主要害蟲，對棉花生產危害嚴重，其中，最常見也是危害最嚴重最具有代表性的是啶蟲脒、吡蟲啉。目前，棉蚜的防治主要依賴于啶蟲脒、噻蟲嗪、吡蟲啉和阿維菌素等化學殺蟲劑。?

在棉蚜對啶蟲脒、吡蟲啉等化學藥劑毒性的敏感性測試方面，目前主要依賴于專業技術人員利用生物測定法及生物化學法兩種檢測技術進行檢測。應用最廣泛的是生物測定法，即實驗室內將測試藥劑按照一定的濃度梯度配制成藥液，采集棉田棉蚜帶回室內，以點滴法或者藥膜法測試不同濃度梯度下的死亡率即死亡蟲口數占測試蟲口數的比率，以敏感性棉蚜為對照，確認48小時后死亡率達50%時的藥劑濃度，計算測試棉蚜及敏感棉蚜在50%死亡率時的濃度比值。根據抗性劃分標準：<3倍為敏感、3-5倍為耐藥力增加、5-10倍為抵抗、10-40倍為中抗、40-60為高抗、>160倍為極高抗。因此當比值小于10，確認該藥劑為棉蚜敏感藥劑，可以在農業生產中安全使用；該比值達為10-40時，確認該藥劑為棉蚜中等敏感藥劑，在農業生產中選擇性、謹慎使用；在該比值達到40以上時，確認該藥劑為棉蚜不敏感藥劑，農業生產中禁止使用。而生物化學法的靶標單一，選擇性更強，但是對儀器設備和人員專業知識、實驗技能要求較高，總之兩種方法的技術要求均較高，專業性強，耗時長，均難以在基層農技推廣部門普及使用。?

發明內容

為了解決現有害蟲對化學藥劑毒性的敏感性測定中現有方法技術要求高、專業性強，耗時長而難以在基層農技推廣部門普及使用的技術難題，本發明旨在提供一種適用大田棉花種植敏感棉蚜檢測鑒別的方法及試劑盒，不僅省略了敏感棉蚜的篩選及敏感性鑒定環節，而且夠簡便、快速測定測試棉蚜對啶蟲脒、吡蟲啉藥劑的毒性敏感性，并對毒性敏感性進行分級，告知該藥劑能否安全使用。?

本發明解決其技術問題所采用的技術方案：?

通過野外自然選取棉蚜室內汰選獲得敏感品系棉蚜，用0.05%的TritonX-100蒸餾水將啶蟲脒液稀釋成0.1mg.L^-1、0.15mg.L^-1、0.2mg.L^-1、0.25mg.L^-1和0.5mg.L^-1不同濃度，以藥膜法測試敏感品系棉蚜死亡率，得到其99%死亡率時的藥液濃度分別為50mg.L^-1，設定劑量為50mg.L^-1啶蟲脒溶液作為敏感品系棉蚜測試的診斷濃度，以該診斷濃度的2倍劑量作為田間敏感品系棉蚜的區分劑量100mg.L^-1；同樣的方法獲得吡蟲啉的區分計量為120?mg.L^-1。以區分劑量在長7cm、口徑1.5cm玻璃試管中滾膜制成選藥試劑盒，滾膜采用將殺蟲劑啶蟲脒和吡蟲啉原藥按照區分計量分別稀釋成濃度100mg.L^-1和120mg.L^-1，再分別均勻涂在試管的內表面，試管內表面積為27.5cm²，室溫放置晾干，避免太陽直射，每平方厘米管壁的藥劑量按照啶蟲脒和吡蟲啉溶液分別為0.44?μg和0.53μg，之后以硅膠塞封口制成試劑盒；接入棉田測試棉蚜，測定3小時后的死亡率，死亡率超過94%時評價測試棉蚜對啶蟲脒為高度敏感，而對吡蟲啉，死亡率超過90%時評價測試棉蚜對吡蟲啉為高度敏感，否則要加大藥劑量。