[發明專利]飼用葡萄糖氧化酶的生產方法

在審

• 申請號: 201410736837.2
• 申請日: 2014-12-05
• 公開（公告）號: CN104381618A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發明（設計）人: 周慧;易翠平
• 申請（專利權）人: 長沙理工大學
• 主分類號: A23K1/165
• 分類號: A23K1/165
• 代理公司: 上海勝康律師事務所 31263
• 代理人: 張堅

技術領域

本發明屬飼料加工領域，具體來說，涉及一種飼用葡萄糖氧化酶的生產方法。

背景技術

葡萄糖氧化酶廣泛分布于動物、植物及微生物體內。但是動植物體中的葡萄糖氧化酶酶量不豐富，因此從動植物體中提取葡萄糖氧化酶具有一定的局限性。霉菌在一定的條件下，產生葡萄糖氧化酶的能力強，便于大規模生產葡萄糖氧化酶。大規模生產葡萄糖氧化酶的主要霉菌來源于黑曲霉和青霉菌。酶的生產方法可分為提取法、發酵法以及化學合成法。發酵法是20世紀50年代以來酶生產的主要方法。

現有飼用葡萄糖氧化酶的工業化生產方法一般采用液態深層發酵技術，但該方法對原料的要求高，主要以優質綿白糖為原料，生產過程中產生的廢水、廢渣、廢氣對環境污染較重。普通固態發酵雖然對原料要求粗放、得率高而且基本對環境無影響，但其設備自動化程度偏低、發酵過程難以控制而且容易染菌。專利號為201110138571.8的專利雖然應用了固態發酵技術，但屬于簡單固態發酵，需要大量勞動力，發酵條件難以控制，容易染菌。

發明內容

本發明的目的是提供一種飼用葡萄糖氧化酶的生產方法，以解決現有普通固態發酵技術發酵條件難以控制的問題。

本發明目的通過以下技術方案實現：所述飼用葡萄糖氧化酶的生產方法，是將活化的特異青霉經至少一次培養，得到特異青霉種子，然后采用流化床固態發酵法發酵特異青霉種子，發酵培養結束后，將流化床固態發酵罐內的固體培養基、發酵產物、發酵菌種干燥并粉碎，得飼用葡萄糖氧化酶成品。

采用流化床固態發酵法發酵特異青霉種子的方法是：以米渣和/或米糠為固體培養基，將所述米渣和/或米糠、水投入流化床固態發酵罐，滅菌并冷卻，將所述特異青霉種子轉接至所述米渣和/或米糠，拌勻，通入無菌空氣，培養。在所述培養過程中可以向流化床固態發酵罐中補充糖。

流化床固態發酵罐中米渣和/或米糠占45～55％，其中米渣和米糠優選比例是2～4︰1，水占45～55％，特異青霉種子的接種量為1～5％。

所述流化床固態發酵法發酵特異青霉種子的發酵條件優選：在28～32℃條件下保壓0.06～0.15MPa，培養18～24h時補加0.05～0.1％綿糖，繼續培養12～24h；固態發酵結束后，50～60℃干燥并粉碎，即為飼用葡萄糖氧化酶成品。

所述活化的特異青霉優選經一級種子培養、二級種子培養、種子培養，得到特異青霉種子。

一級種子培養是將活化的特異青霉轉接至一級液體種子培養基培養，得到一級種子，所述一級液體種子培養基包括1～2％米渣、0.05～0.2％NaCl、0.05～0.2％CaCl₂、0.05～0.2％KH₂PO₄、0.01～0.06％MgSO₄·7H₂O。

二級種子培養是將一級種子轉接至二級液體種子培養基培養，得到二級種子，所述二級液體種子培養基包括1.5～3％米渣、0.05～0.2％NaCl、0.05～0.2％CaCl₂、0.05～0.2％KH₂PO₄、0.01～0.06％MgSO₄·7H₂O。

種子培養是將二級種子轉接至種子培養基培養，得到特異青霉種子，所述種子培養基包括2～4％米渣、0.05～0.2％NaCl、0.05～0.2％CaCl₂、0.05～0.2％KH₂PO₄、0.01～0.06％MgSO₄·7H₂O。

本發明的優點：與普通固態發酵技術相比，本發明采用的是流化床固態發酵法，發酵條件易于控制，不易污染雜菌，而且不產生“三廢”，對環境無污染。采用可以作為飼用的米渣和/或米糠作為特異青霉種子的固體培養基，發酵結束后，不需要對發酵產物——葡萄糖氧化酶進行提純，即可直接將米渣和/或米糠、特異青霉菌種以及產物葡萄糖氧化酶一起干燥，制成飼用葡萄糖氧化酶。不僅工藝簡單，而且可促進米渣和/或米糠進行生物循環利用。與用普通固態發酵技術生產飼用葡萄糖氧化酶相比，本發明生產的葡萄糖氧化酶活力高。

具體實施方式

以下結合實施例對本發明作進一步詳細說明。

本發明使用的特異青霉通過商業購買方式獲得。

本發明的飼用葡萄糖氧化酶成品的酶活力檢測方法如下：