[發明專利]一種用于發酵法生產去甲基金霉素的培養基

在審

• 申請號: 201410735106.6
• 申請日: 2014-12-05
• 公開（公告）號: CN104404120A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發明（設計）人: 齊巧娟;趙麗紅
• 申請（專利權）人: 河北圣雪大成制藥有限責任公司
• 主分類號: C12P29/00
• 分類號: C12P29/00;C12R1/485
• 代理公司: 石家莊元匯專利代理事務所(特殊普通合伙) 13115
• 代理人: 劉聞鐸

技術領域

本發明屬于微生物發酵的技術領域，具體涉及一種發酵法生產去甲基金霉素的過程中使用的培養基。

背景技術

去甲基金霉素，英文名稱為Demethylchlortetracycline，簡稱DMCT，又稱地美環素、去甲氯四環素，是四環族抗生素的衍生產品，由金色鏈霉菌(Streptomyces?aureofaciens)產生，在1957年由McCormick首先報導。去甲基金霉素的抗菌譜與金霉素相似，比金霉素穩定，其抗菌作用比四環素、土霉素強，臨床用于肺炎、尿路感染、淋病、細菌性痢疾、布氏桿菌病及小兒猩紅熱等。

去甲基金霉素不僅臨床應用效果好，還可作為原料用于生產替加環素和二甲氨基四環素，因此具有良好的發展前途。

目前去甲基金霉素的主要生產方式為生物發酵法，中國專利201310575478.2公開了一種利用金色鏈霉菌發酵生產去甲基金霉素的培養基和培養方法，去甲基金霉素菌種培養最高發酵單位為180h發酵周期13000mg/L，但是其發酵工藝為三級發酵工藝，且其培養基中含有魚油和蚯蚓混合粉等動物基原材料，根據獸用及人用GMP管理規定，其在工業生產中難以實現，無法實際應用。

發明內容

本發明的目的是提供一種在微生物發酵法生產去甲基金霉素的過程中使用的培養基，通過該培養基發酵得到的去甲基金霉素的發酵單位120h時在7000μg/mL以上，同時使用該培養基制備去甲基金霉素只需一步發酵，操作過程非常簡單。

為了實現本發明所述目的，發明人提供了以下技術方案。

一種用于發酵法生產去甲基金霉素的培養基，包括碳源、氮源、無機鹽和氨基酸，其中，所述培養基中碳源的濃度為20-80g/L，氮源的濃度為10-50g/L。

上述用于發酵法生產去甲基金霉素的培養基，所述培養基中碳源的濃度為40-60g/L，氮源的濃度為28g/L。

上述用于發酵法生產去甲基金霉素的培養基，所述培養基中碳源的濃度為50g/L。

上述用于發酵法生產去甲基金霉素的培養基，所述培養基中的碳源、氮源、無機鹽、氨基酸均為水溶性物質。

上述用于發酵法生產去甲基金霉素的培養基，所述碳源為可溶性淀粉、蔗糖、麥芽糖、乳糖、葡萄糖中的一種或任意兩種的混合物。

上述用于發酵法生產去甲基金霉素的培養基，所述氮源為酵母粉、酵母浸粉、酵母膏、大豆蛋白胨中的一種或任意兩種的混合物。

上述用于發酵法生產去甲基金霉素的培養基，所述無機鹽為硝酸鈉、磷酸氫二鉀和氯化銅。

上述用于發酵法生產去甲基金霉素的培養基，所述硝酸鈉的濃度為0.5-2g/L，優選為1.2g/L，磷酸氫二鉀的濃度為0.01-0.1g/L，優選為0.08g/L，氯化銅的濃度為1-3g/L，優選為1.5g/L。

上述用于發酵法生產去甲基金霉素的培養基，所述氨基酸為L-賴氨酸。

上述用于發酵法生產去甲基金霉素的培養基，所述L-賴氨酸的濃度為1-15g/L，優選9g/L。

發明人在研究過程中發現，用于發酵法生產去甲基金霉素的培養基中，碳源和氮源的濃度是影響微生物發酵得到去甲基金霉素發酵單位高低的主要因素。本發明通過限定培養基中碳源的濃度為20-80g/L，氮源的濃度為10-50g/L，提高了去甲基金霉素的產率，所得去甲基金霉素的發酵單位120時在7000μg/mL以上。當碳源的濃度為50g/L，氮源的濃度為28g/L時，所得去甲基金霉素的發酵單位能達到120h周期7930μg/mL。

本發明所述培養基中硝酸鈉作為速效氮源，可以調節滲透壓，磷酸氫二鉀能夠維持菌體生長，氯化銅為金屬離子，可以刺激產素，L-賴氨酸同樣也可以刺激產素。

本發明所述培養基的成分均選用水可溶性物質，溶解充分，可使菌體充分利用營養物質，同時減少了固體殘渣，提高了提取過程中的固液分離效率，減少了溶媒損耗，減少了提取過程中凈化劑的使用量、減少了固體廢物的排放，降低了能耗，減輕了生產企業由于發酵液后處理所帶來的經濟負擔。

具體實施方式

下面通過具體實施例對本發明所述內容做進一步詳細的說明。

實施例1

稱取葡萄糖50g，酵母粉28g，硝酸鈉1.2g，磷酸氫二鉀0.08g，氯化銅1.5g，L-賴氨酸9g，飲用水定容至1L。接入金色鏈霉菌的種子培養物，接種量10％，溫度28℃，培養120h放瓶，結果得到7930μg/mL的去甲基金霉素。

實施例2-5