[發明專利]一種畢赤酵母菌Pichia sp.SIT2014及其培養方法和應用

在審

• 申請號: 201410734438.2
• 申請日: 2014-12-08
• 公開（公告）號: CN104560745A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發明（設計）人: 徐毅;陳穎;陳建波
• 申請（專利權）人: 上海應用技術學院
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12P41/00;C12P7/22;C12R1/84
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 吳寶根;馬文峰

1.一種畢赤酵母菌Pichia?sp.SIT2014,保藏編號為CGMCC?NO.9300。

2.如權利要求1所述的畢赤酵母菌Pichia?sp.SIT2014的培養方法，其特征在??于步驟如下：

取4℃冰箱保存的畢赤酵母Pichia?sp.SIT2014?斜面菌種，挑取一環菌種接入到裝有15ml種子培養基的100ml搖瓶中，在搖床上控制溫度為30℃、轉速為180rpm培養12-18h得到種子液；

然后按種子液：發酵培養基的體積比為5%的接種量，將種子液接種到發酵培養基中，在搖床上控制溫度為30℃、轉速為180rpm進行發酵培養15-24h，得到的發酵液離心，收獲得到畢赤酵母Pichia?sp.SIT2014細胞；

以上所述的種子培養基、發酵培養基相同，按每升計算，含葡萄糖15g，胰蛋白胨5g，酵母粉5g，K₂HPO₄?0.5g，KH₂PO₄?0.5g，NaCl?1g，MgSO₄·7H₂O?0.5g，余量為水。

3.利用如權利要求1所述的畢赤酵母菌Pichia?sp.SIT2014作為生物催化劑催化前體2-羥基芳基乙酮不對稱還原為手性芳基鄰二醇；

所述的2-羥基芳基乙酮為2-羥基苯乙酮、2-羥基間氯苯乙酮，2-羥基鄰氯苯乙酮、2-羥基對溴苯乙酮或2-羥基對氯苯乙酮；

對應所得的手性芳基鄰二醇為S構型的苯乙二醇、S構型的間氯苯乙二醇、S構型的鄰氯苯乙二醇、S構型的對溴苯乙二醇或S構型的對氯苯乙二醇。

4.如權利要求3所述的利用畢赤酵母菌Pichia?sp.SIT2014作為生物催化劑催化前體2-羥基芳基乙酮不對稱還原為手性芳基鄰二醇的方法，其特征在于具體包括如下步驟：

（1）、培養畢赤酵母細胞Pichia?sp.SIT2014

取4℃冰箱保存的畢赤酵母Pichia?sp.SIT2014?斜面菌種，挑取一環菌種接入到裝有15ml種子培養基的100ml搖瓶中，在搖床上控制溫度為30℃、轉速為180rpm進行種子培養12-18h，得到種子液；

然后按種子液：發酵培養基的體積比為5%的接種量，將種子液接種到發酵培養基中，在搖床上控制溫度為30℃、轉速為180rpm進行發酵培養15-24h，得到的發酵液離心，收獲的細胞即為畢赤酵母細胞Pichia?sp.SIT2014細胞，然后將其置于緩沖液中保存；

以上所述的種子培養基、發酵培養基相同，按每升計算，含葡萄糖15g，胰蛋白胨5g，酵母粉5g，K₂HPO₄?0.5g，KH₂PO₄?0.5g，NaCl?1g，MgSO₄·7H₂O?0.5g，余量為水；

所述的緩沖液為pH為5.5-8.0的磷酸鈉水溶液，其用量按畢赤酵母細胞Pichia?sp.SIT2014干重：緩沖液為5-100g：1L的比例計算；

（2）、向步驟（1）所得的含有畢赤酵母Pichia?sp.SIT2014細胞的緩沖液中加入2-羥基芳基乙酮，然后控制溫度為30-50℃進行還原反應3-48h得到反應液；

上述反應所用2-羥基芳基乙酮的量，按畢赤酵母Pichia?sp.SIT2014細胞干重：2-羥基芳基乙酮為5-100g：5-100mmol的比例計算；

（3）、將步驟（2）的反應液控制轉速為10000r/min進行離心分離，得到的上清液用等體積的乙酸乙酯萃取三次后，萃取液用無水硫酸鈉干燥后用旋轉蒸發儀蒸干，即得手性芳基鄰二醇。

5.如權利要求4所述的利用畢赤酵母菌Pichia?sp.SIT2014作為生物催化劑催化前體2-羥基芳基乙酮不對稱還原為手性芳基鄰二醇的方法，其特征在于步驟（1）中所述的緩沖液為pH為5.5～7.0的磷酸鈉水溶液。