[發明專利]一種微扦插快速繁殖土沉香種苗的方法

在審

• 申請號: 201410732379.5
• 申請日: 2014-12-06
• 公開（公告）號: CN105724245A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發明（設計）人: 張秀國
• 申請（專利權）人: 張秀國
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于農業生物技術領域，具體為一種利用試管莖段微扦插快速繁殖土沉香種苗的方法。

背景技術

土沉香又稱香材，白木香，牙香樹，女兒香，棧香，青桂香，崖香，芫香，沉香為瑞香科常綠喬木，漸危種。多生于山地雨林或半常綠季雨林中。是中國特有而珍貴的藥用植物，近年由于常被采取供藥用，損傷林木極為嚴重，現僅有零星散生的殘存植株。為國家Ⅱ級重點保護野生植物。該植物老莖受傷后所積得的樹脂，俗稱沉香，為治胃病特效藥。此外，還可以作香料原料，提取芳香油等。

土沉香傳統的繁殖方法采用種子繁殖，該方法存在的問題：(1)種子資源少，大量采集困難；(2)種子不耐儲存，壽命短，無法實現定期播種育苗；(3)種子發芽率較低，僅達到50％左右。

近年來，扦插繁殖和組培繁殖成為土沉香種苗繁殖的研究重點。扦插繁殖現存的問題是：(1)扦插繁殖成活率低，甚至全部死亡；(2)扦插條資源緊缺，批量繁殖困難。組培繁殖目前采用誘導愈傷組織、分化增殖愈傷組織和誘導不定芽生根的方式獲得無菌苗，這種方式存在的問題是：(1)誘導愈傷組織時間較長；(2)愈傷組織分化為不定芽的頻率較低，分化出的不定芽變異率高；(3)愈傷組織分化出的不定芽伸長速度慢，達到生根標準的時間長。這些問題嚴重阻礙了土沉香種苗的規模化生產，因而無法滿足市場需求。為此，必須建立能大量、快速擴繁土沉香種苗的生產技術體系。

發明內容

本發明的目的是提供一種微扦插快速繁殖土沉香種苗的方法，利用試管中莖段側芽萌發和伸長速度快的特點，實現了土沉香種苗大規模快速擴繁的目的。

本發明利用少量種子獲得無菌苗，以無菌苗莖段為外植體，通過試管微扦插促進側芽不斷萌發進行快速增殖，實現土沉香種苗大規模擴繁。

本發明所采用的技術方案：一種微扦插快速繁殖土沉香種苗的方法，包括三個過程：無菌苗的獲得、莖段微扦插、莖段生根。

1、無菌苗的獲得

選取土沉香的蒴果經消毒后將種子剝出，將種子接種到誘芽培養基進行培養至長成幼苗，所述誘芽培養基是以MS培養基為基本培養基并附加6-芐基腺嘌呤、α-萘乙酸。

2、莖段微扦插

將步驟1所獲得的幼苗切成莖段，將莖段的基部向下插入微扦插培養基中進行培養至長出側芽，再將側芽切成莖段，然后將其基部向下插入新鮮的微扦插培養基中進行培養。所述微扦插培養基是以MS培養基為基本培養基并附加6-芐基腺嘌呤、吲哚乙酸。

3、莖段生根

將步驟2所獲得的側芽切成莖段，并將其接種到生根培養基上，先暗培養再進行光照培養，至莖段生根即可獲得土沉香種苗。所述生根培養基是以1/2MS培養基為基本培養基并附加α-萘乙酸。

本發明工藝簡單易行，操作簡單，增殖速度快，解決了利用土沉香種子繁殖種苗中種子數量少、發芽率低、繁殖速度慢的問題，實現了土沉香種苗的長期大規模快速增殖，可大量、快速、持續獲得高質量的土沉香試管苗，實用性強，為土沉香大規模擴繁增殖提供了高效的方法，為土沉香種苗的規模化、工廠化生產奠定了基礎，也為保護野生土沉香種質資源開辟了一條切實可行的途徑。

具體實施方式

下面對本發明作進一步說明。

本發明所提供的微扦插快速繁殖土沉香種苗的方法，包括無菌苗的獲得、莖段微扦插、莖段生根。

1)、無菌苗的獲得

選取土沉香的蒴果經消毒后將種子剝出，將種子接種到誘芽培養基進行培養至長成幼苗，培養溫度度為24～27℃，光照強度為15～20μmol·m^-2·s^-1，光照時間為10h·d^-1，培養20～30天；所述誘芽培養基是以MS培養基為基本培養基并附加6-芐基腺嘌呤0.5mg·L^-1、α-萘乙酸0.1mg·L^-1。

2)、莖段微扦插

將步驟1所獲得的幼苗切成帶1～2節的莖段，將莖段的基部向下插入微扦插培養基中進行培養至長出側芽，再將側芽切成帶1～2節的莖段，然后將其基部向下插入新鮮的微扦插培養基中進行培養，培養溫度度為26～29℃，光照強度為30～40μmol·m^-2·s^-1，光照時間為10h·d^-1；所述微扦插培養基是以MS培養基為基本培養基并附加6-芐基腺嘌呤2.0mg·L^-1、吲哚乙酸0.1mg·L^-1。

3)、莖段生根

將步驟2所獲得的側芽切成帶1～2節的莖段，并將其接種到生根培養基上，先暗培養7～14天再進行光照培養20～30天，至莖段生根即可獲得土沉香種苗。所述生根培養基是以1/2MS培養基為基本培養基并附加α-萘乙酸0.5mg·L^-1。