[發(fā)明專(zhuān)利]一種蛹蟲(chóng)草腺苷的提取方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410732004.9
• 申請(qǐng)日: 2014-12-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104478978A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-04-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳喜軍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 黑龍江眾生生物工程有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07H19/167
• 分類(lèi)號(hào): C07H19/167;C07H19/16;C07H1/08
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物提取技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種蛹蟲(chóng)草腺苷的提取方法。

背景技術(shù)

蛹蟲(chóng)草又名北冬蟲(chóng)夏草、北蟲(chóng)草等，與冬蟲(chóng)夏草同屬異種，是蟲(chóng)草屬的模式種，屬于子囊菌亞門(mén)蟲(chóng)草屬，是其寄生在昆蟲(chóng)綱鱗翅目夜蛾科昆蟲(chóng)蛹體上所長(zhǎng)出的子座與僵死蛹體的復(fù)合體。多年的研究表明蛹蟲(chóng)草具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、抗感染等多種藥理活性，廣泛用于腫瘤、免疫功能低下、包括艾滋病毒感染等多種疾病中。

腺苷是一種內(nèi)源性嘌呤核苷酸，具有廣泛的生理活性，蛹蟲(chóng)草中腺苷的含量與冬蟲(chóng)夏草相似，甚至更高，多在0.01%以上。至今已從蟲(chóng)草及發(fā)酵菌絲中分離鑒定有11個(gè)核苷類(lèi)化合物，包括腺嘌呤、腺苷、尿嘧啶、尿苷、鳥(niǎo)嘌呤、鳥(niǎo)苷、次黃嘌呤、次黃嘌呤核苷、胸腺嘧啶、胸腺嘧啶脫氧核苷及尿嘧啶脫氧核苷等。蟲(chóng)草素是蛹蟲(chóng)草中主要活性成分，也是第一個(gè)從真菌中分離出來(lái)的核苷類(lèi)抗生素，又稱(chēng)蟲(chóng)草菌素、蛹蟲(chóng)草菌素。蟲(chóng)草素的分子式為C10H13N5O3，相對(duì)分子質(zhì)量為251。蛹蟲(chóng)草是在目前已報(bào)道的300余種蟲(chóng)草菌中唯一能大量形成蟲(chóng)草素的菌種。天然冬蟲(chóng)夏草或發(fā)酵菌絲體中蟲(chóng)草素不存在或極其微量。目前國(guó)內(nèi)外針對(duì)其結(jié)構(gòu)及藥理作用已經(jīng)進(jìn)行了詳細(xì)的研究，研究證明蟲(chóng)草素具有多種生物活性，主要表現(xiàn)在抗菌、抗炎、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)等幾個(gè)方面。其中蟲(chóng)草素對(duì)腫瘤的抑制作用一直是廣大科學(xué)家們關(guān)注的熱點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種蛹蟲(chóng)草腺苷的提取方法。

本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：一種蛹蟲(chóng)草腺苷的提取方法，其提取方法的具體步驟為：

（1）超微粉碎：稱(chēng)取200g烘干的蛹蟲(chóng)草子實(shí)體，放入超微粉碎機(jī)中粉碎5-15分鐘；

（2）蛹蟲(chóng)草腺苷的超聲仿生提取、酶解提取，包括：

a、按照料液比，每g物料加入1ml的提取劑，為6~25m/v的比例加入PH值為4.0-6.0的鹽酸溶液，稱(chēng)取質(zhì)量體積比為0.5~1%的破壁酶，于37℃條件下保溫10~30min，然后于超聲波中以60%~80%的功率加熱l~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，沉淀自然風(fēng)干；

b、再按照料液比，每g物料加入1ml的提取劑，為6~25m/v的比例向上述PH值為4.0-6.0的鹽酸溶液提取，結(jié)束后自然風(fēng)干的沉淀中加入pH為6~7.5，濃度為0.1mol/L的磷酸鈉緩沖溶液，于超聲波中以60%~80%的功率加熱l~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，沉淀自然風(fēng)干收集上清液，沉淀自然風(fēng)干；

c、最后向自然風(fēng)干的沉淀中加入6~30倍體積，每g物料加入1ml的提取劑，PH值為8.0~9.0氫氧化鈉堿性溶液，于超聲波中以60%~80%的功率加熱l~5鐘之后，以8000g~12000g的離心力于室溫下離心10~30分鐘，收集上清液，棄去沉淀；

d、合并三次上清液，過(guò)0.45um的水系膜后取100ul加超純水稀釋至1000ul，過(guò)0.22um的水系膜后，于高效液相色譜儀中測(cè)定腺苷的含量，得到蛹蟲(chóng)草腺苷。

本發(fā)明具有以下有益效果

1.該方法模擬人體胃腸道酸堿環(huán)境進(jìn)行蛹蟲(chóng)草腺苷的提取，所獲得的腺苷易于加工成各種類(lèi)型的藥劑；在生產(chǎn)加工成口服液或其他類(lèi)型的劑型之后，可確保蛹蟲(chóng)草有效成分的直接吸收，減輕腸胃負(fù)擔(dān)；

2.該方法提取蛹蟲(chóng)草腺苷含量高，腺苷的含量可達(dá)到每g原藥材提取得到2.825mg的量，最終活性成分的提取率可高達(dá)0.304%，比其他的常規(guī)提取方法提取率都高，且質(zhì)量可控，料損少，生產(chǎn)周期短，適合大規(guī)模生產(chǎn)，市場(chǎng)潛力巨大；

3.酶解技術(shù)破除了蛹蟲(chóng)草堅(jiān)硬的細(xì)胞壁，有利于細(xì)胞內(nèi)容物的溶出，有利于提取過(guò)程的順利進(jìn)行，在保證腺苷的生物活性的同時(shí)，提高腺苷的提職率，減少浪費(fèi)；

4.應(yīng)用該方法提取得到的腺苷，不僅提取率高，易于后續(xù)的分離純化，而且易于吸收，能夠充分發(fā)揮腺苷在體內(nèi)的功效。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

一種蛹蟲(chóng)草腺苷的提取方法，其提取方法的具體步驟為：

（1）超微粉碎：稱(chēng)取200g烘干的蛹蟲(chóng)草子實(shí)體，放入超微粉碎機(jī)中粉碎10分鐘。