[發(fā)明專利]富含生長因子的血小板纖維蛋白及其釋放液的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410730708.2
• 申請(qǐng)日: 2014-12-05
• 公開（公告）號(hào): CN105708858A
• 公開（公告）日: 2016-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 莊明熙;郭宗甫;莊季璇;李啟安;馬鈺欣;顏正安
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 國璽干細(xì)胞應(yīng)用技術(shù)股份有限公司
• 主分類號(hào): A61K35/14
• 分類號(hào): A61K35/14;A61K35/19;A61K38/18;A61P17/02
• 代理公司: 北京匯澤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11228
• 代理人: 張秋越

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明關(guān)于一種富含生長因子的血小板纖維蛋白及其釋放液(Growth-Factor-Platelet-RichFibrinandreleasate，GFPRF)的制備方法，尤其是一種相較于現(xiàn)有的富含血小板的纖維蛋白(Platelet-RichFibrin，PRF)，具有更高濃度的生長因子（GrowthFactor）的富含生長因子的血小板纖維蛋白及其釋放液的制備方法。

背景技術(shù)

在以往，當(dāng)醫(yī)生進(jìn)行創(chuàng)傷或手術(shù)傷口的處理時(shí)，除了利用抗生素去避免感染發(fā)炎，傷口的愈合則只能依靠病人自身的修復(fù)力。然而，隨著自體血小板濃縮物的出現(xiàn)，加快愈合速度不再只是夢(mèng)想。自體血小板濃縮物具有多種的生長因子、細(xì)胞激素和活性蛋白質(zhì)等，可以放進(jìn)傷口或加入植入物中，以加速傷口的愈合。

隨著研究的進(jìn)步，自體血小板濃縮物從單純的濃縮血小板，到需借由牛的凝血酶和氯化鈣引發(fā)血小板活化的富含血小板的血漿(Platelet-RichPlasma，PRP)，再發(fā)展為不需其他添加物的富含血小板的纖維蛋白。血小板含有許多的生物活性蛋白質(zhì)，包括數(shù)種生長因子，具有促進(jìn)干細(xì)胞與修復(fù)細(xì)胞的移動(dòng)、增生、分化、新血管生成及膠原蛋白生成的作用，因此可以加速傷口愈合。當(dāng)血小板的濃度愈高，生長因子愈多，不但可以更加速愈合速度，對(duì)于復(fù)雜傷口的治療，也有很大的幫助。此外，富含血小板的纖維蛋白也可以用在其他生物體軟組織以及硬組織的修復(fù)上，例如用于自體脂肪移植的整型手術(shù)，或是牙科中促進(jìn)骨再生的技術(shù)當(dāng)中。

目前富含血小板的纖維蛋白的制備方式，多是由哺乳動(dòng)物自體提供約10~60cc的靜脈血，再經(jīng)過離心處理而得，并具有下列的優(yōu)點(diǎn)：完全是自體的產(chǎn)物，所以沒有免疫抗原抗體的排斥問題；血液離心時(shí)，自然形成致密的纖維蛋白基質(zhì)，較有耐受力；高密集的纖維蛋白基質(zhì)將血小板、白血球、與細(xì)胞激素絆在其間，血小板可長時(shí)間慢慢地釋出生長因子以及活性蛋白質(zhì)，且可支撐與愈合有關(guān)的細(xì)胞移動(dòng)與細(xì)胞激素的釋放；被絆在致密的纖維蛋白基質(zhì)的白血球，有對(duì)抗感染及免疫調(diào)節(jié)方面的作用。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于以上的問題，本發(fā)明主要提供一種富含生長因子的血小板纖維蛋白及其釋放液的制備方法，尤其是一種相較于現(xiàn)有的富含血小板的纖維蛋白，具有更高濃度的生長因子的富含生長因子的血小板纖維蛋白及其釋放液的制備方法。

為了達(dá)到以上目的，本發(fā)明提供一種富含生長因子的血小板纖維蛋白及其釋放液的制備方法，包含下列步驟：提供哺乳動(dòng)物自體的血液，置于容器；將血液搖晃；將血液進(jìn)行一離心后靜止，使血液在容器中分離成三層物質(zhì)，其中上層與下層為液態(tài)物質(zhì)，中間層則凝結(jié)為一塊狀物質(zhì)，即為富含生長因子的血小板纖維蛋白；取出塊狀物質(zhì)，并將塊狀物質(zhì)靜置，待其釋放出液態(tài)物質(zhì)；以及，分離取出液態(tài)物質(zhì)，即為富含生長因子的血小板纖維蛋白的釋放液。

本發(fā)明一實(shí)施例中，其中容器的形狀為長形，并具有兩端和一中間段，而將血液搖晃，是指將容器的兩端相對(duì)于中間段的一支點(diǎn)，重復(fù)進(jìn)行上下直線來回或是畫圓的運(yùn)動(dòng)。

本發(fā)明一實(shí)施例中，其中搖晃血液的時(shí)間為45至90秒，較佳為60秒。

本發(fā)明一實(shí)施例中，其中重復(fù)進(jìn)行上下直線來回或是畫圓的運(yùn)動(dòng)的次數(shù)為30至60次。

本發(fā)明一實(shí)施例中，其中離心的時(shí)間為9至12分鐘，較佳為10分鐘。

本發(fā)明一實(shí)施例中，其中離心的轉(zhuǎn)速為2800至3200rpm，較佳為3000rpm。

本發(fā)明一實(shí)施例中，其中取出塊狀物質(zhì)，是利用無菌的鑷子將塊狀物質(zhì)夾出。

本發(fā)明一實(shí)施例中，其中容器為血清分離管（SerumSeparationTube），較佳為迷彩頭生化采血管，例如是BD公司所制作，型號(hào)為367988的采血管。另外，容器可以在放置血液前，先預(yù)置有促凝劑以及凝膠（clotactivatorandgel）。

本發(fā)明一實(shí)施例中，其中將塊狀物質(zhì)靜置，是指將塊狀物質(zhì)置于試管中，并將試管置于溫水中，溫水的溫度較佳為攝氏37度。

本發(fā)明一實(shí)施例中，其中將該塊狀物質(zhì)靜置于的時(shí)間為2至5小時(shí)，較佳為3小時(shí)。