[發明專利]一種煙草疫霉接種煙草的方法

在審

• 申請號: 201410726158.7
• 申請日: 2014-12-04
• 公開（公告）號: CN104396599A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發明（設計）人: 方敦煌;陳學軍;肖炳光;童治軍;楊大海;吳興富
• 申請（專利權）人: 云南省煙草農業科學研究院
• 主分類號: A01G7/06
• 分類號: A01G7/06
• 代理公司: 昆明知道專利事務所(特殊普通合伙企業) 53116
• 代理人: 姜開俠

1.一種煙草疫霉接種煙草的方法，其特征在于包括煙草子葉苗的準備、疫霉游動孢子懸浮液的制備、灌根接種、統計評價步驟，具體包括：

A、煙草子葉苗的準備：將煙草種子表面消毒后播種于發芽床上，于相對濕度80~85%、光照強度1000~2000Lx、溫度25~28℃下培養7~10天后發芽形成子葉苗備用；

B、煙草疫霉游動孢子懸浮液的制備：將煙草疫霉接種至OA培養基平板，于25~28℃下黑暗培養7~10天至菌絲長滿整個平板，取菌絲切成小塊得到菌絲塊，液體培養誘導產生游動孢子囊、低溫促進游動孢子囊釋放游動孢子用無菌水調節游動孢子濃度為10^4~6個/ml，得到煙草疫霉游動孢子懸浮液；

C、灌根接種；取B步驟獲得的煙草疫霉游動孢子懸浮液緩慢滴加至發芽床，讓其滲透到每株子葉苗的根部；

D、統計發病情況，評價抗病結果：接種后的子葉苗在相對濕度80~85%、光照強度1000~2000Lx、溫度25~28℃下繼續培養3~5天，調查子葉苗的發病率，按發病率劃分抗感性，免疫或高抗發病率為0，抗病發病率為0.1~25%，中抗發病率為25.1~45%，中感發病率為45.1~65%，感病發病率為65.1~80%，高感發病率為80.1~100%，其中免疫或高抗、抗病、中抗的材料即可作為抗源。

2.根據權利要求1所述的煙草疫霉接種煙草的方法，其特征在于A步驟中所述的表面消毒是50~55℃溫湯浸種8~10分鐘，或1%硫酸銅或0.1%硝酸銀溶液浸種10~15分鐘。

3.根據權利要求1所述的煙草疫霉接種煙草的方法，其特征在于所述的發芽床是由海綿和濾紙做成。

4.根據權利要求1所述的煙草疫霉接種煙草的方法，其特征在于B步驟中所述的OA培養基配方為：?燕麥片30克、自來水1000毫升。

5.根據權利要求1所述的煙草疫霉接種煙草的方法，其特征在于B步驟中所述的10%V8汁液體培養基配方為：用自來水稀釋V8汁至10%、再加0.1%的碳酸鈣。

6.根據權利要求1所述的煙草疫霉接種煙草的方法，其特征在于B步驟中所述的菌絲塊的大小為2mm×2mm。

7.根據權利要求1所述的煙草疫霉接種煙草的方法，其特征在于B步驟中所述的液體培養誘導產生游動孢子囊是將菌絲塊加入到10%V8汁液體培養基的培養皿中，每皿加菌絲塊20~40片，繼續于25~28℃下黑暗培養3~4天，傾去培養液，用滅菌水沖洗3~5次，每天換加滅菌水1~3次，連續2~3天誘導游動孢子囊的產生，直至每平方厘米菌絲塊游動孢子囊在10000個以上時停止誘導。

8.根據權利要求1所述的煙草疫霉接種煙草的方法，其特征在于B步驟中所述的低溫促進游動孢子囊釋放游動孢子是將產生游動孢子的菌絲塊5~8℃低溫處理20~30min，取出置于室溫15~30min誘導游動孢子囊釋放游動孢子。

9.根據權利要求1所述的煙草疫霉接種煙草的方法，其特征在于C步驟中所述的煙草疫霉游動孢子懸浮液滴加量為10~15毫升。