[發明專利]一種高純度秋茄葉總黃酮的分離純化方法

在審

• 申請號: 201410725902.1
• 申請日: 2014-12-04
• 公開（公告）號: CN104473981A
• 公開（公告）日: 2015-04-01
• 發明（設計）人: 李成平;唐嵐;饒桂維;計燕萍;徐興;嚴小平;活潑
• 申請（專利權）人: 浙江樹人大學
• 主分類號: A61K36/185
• 分類號: A61K36/185;A61K127/00
• 代理公司: 杭州賽科專利代理事務所 33230
• 代理人: 馮年群

技術領域

本發明涉及一種高純度秋茄葉總黃酮的制備方法，屬于生物分離技術領域。

背景技術

秋茄（Kandelia?candel）為紅樹科秋茄屬植物，秋茄為我國紅樹植物中最耐寒的樹種，在我國紅樹植物分布區自南向北，紅樹植物種類逐漸減少，只有秋茄還有分布，達到最北端28^o25'N（浙江樂清）。秋茄中的化學成分主要有黃酮類、鞣質類、甾醇類、脂肪酸和多糖等。近年來諸多學者對秋茄中的各種化學成分研究，發現了一些具備藥物開發價值的功用，例如學者李寶才在《紅樹林秋茄葉類脂化學及活性物質的研究》一文中報道：秋茄葉總黃酮（含量為29.3%）有抗氧化作用，能明顯降低四氧嘧啶所致高過氧化脂質小鼠血清MDA值（中國科學院研究生院廣州地球化學研究所，博士畢業論文，2002.）。此外，本申請的發明人經過前期研究也發現了：秋茄葉總黃酮具有較好的抑制黑色素生成、抑制酪氨酸酶活性、抗氧化和抗紫外作用，且作用的強弱與秋茄葉總黃酮的純度有一定的關聯。

現有的秋茄葉總黃酮的制備方法，經檢索只有兩篇文獻提及，其一是紀麗麗、宋文東、陳煜藩在《紅樹植物秋茄葉黃酮的提取及抑菌活性實驗》一文中公開的方法：秋茄葉粉末1kg用5L?60%乙醇浸漬4次，濃縮除去乙醇后離心取上清液，再通過AB-8大孔離子交換樹脂，用去離子水沖洗柱子至清亮，再用75%乙醇沖洗，收集乙醇液，回收乙醇，干燥，得到總黃酮45.3g，總黃酮的含量為17.8%（《天然產物研究與開發》，2009年21卷：179-181頁）。其二是李寶才、聞克威等人在《秋茄葉中蘆丁的分離與鑒定》一文中公開的方法：1kg秋茄葉粉末用5L?60%乙醇浸漬4次，濃縮除去乙醇后離心取上清液，再通過DA201大孔離子交換樹脂，用去離子水沖洗柱子至清亮，再用80%乙醇沖洗，收集乙醇液，回收乙醇，干燥，得粗黃酮50.2g，總黃酮的含量為18.9%。將上述粗黃酮45g，研磨成粉，用500ml乙醇/三氯甲烷（3:17）混合溶劑，萃取2次，離心取上清液。殘余物用500ml乙醇/三氯甲烷（1:1）萃取2次，離心，取上清液。合并所有離心液，回收溶劑，干燥，得“精制黃酮”9.?6g，黃酮含量為29.?3%（《熱帶海洋學報》，2002年21卷第3期）。上述兩種方法的主要缺點在于：所得到的總黃酮純度低，過完大孔樹脂后，純度都小于20%，即使用大量的有毒有機溶劑萃取后，總黃酮含量也沒超過30%，影響藥物開發功效，且采用有毒有機溶劑萃取也易引發環境污染的隱患。

發明內容

本發明目的在于提供一種高純度秋茄葉總黃酮的分離純化方法，解決了背景技術中所述的技術缺陷。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種高純度秋茄葉總黃酮的分離純化方法，包括如下步驟：

（1）取秋茄葉粉碎成粗粉，用15倍的體積分數60~70%的乙醇溶液提取2次，每次的提取時間為0.5~1.5h，提取溫度為60~80℃，合并提取液；

（2）濃縮步驟（1）所得的提取液使其濃度為5mg/ml，離心，取上清液，用非極性大孔吸附樹脂純化，吸附30min，水洗除雜，再用35~80%的乙醇洗脫；非極性大孔吸附樹脂為HPD722型、HPD100型、HPD826型吸附樹脂中的一種或幾種；

（3）收集步驟（2）所得的洗脫液，減壓回收溶劑，干燥，粉碎，即得本品，本品中秋茄葉總黃酮的含量至少為60%。

本發明選用的HPD100型、HPD722型和HPD826型非極性大孔吸附樹脂對秋茄葉總黃酮的吸附量和解吸率明顯優于現有技術中其他幾種實驗樹脂，如采用靜態吸附-解吸附實驗（具體實驗方法見具體實施實施方式中記載）進行考察，考察結果表明，HPD100的吸附量可達到71.99?mg/mL，解吸率87.15%，HPD722的吸附量可達到70.41?mg/mL，解吸率87.40%，HPD826的吸附量可達到66.55?mg/mL，解吸率88.14%，吸附量遠大于現有技術中的HPD417的35.40?mg/mL、DM130的49.45?mg/mL、AB-8的48.85?mg/mL、D101的49.84?mg/mL。

優選的，步驟（1）的提取時間0.5h，提取溫度為80℃。

優選的，步驟（2）優選采用HPD722型吸附樹脂純化。在動態吸附和解吸方面（具體實驗方法見具體實施實施方式中記載），HPD722型樹脂的吸附量為19.57mg/mL，解吸率97.84%，相比于HPD100、HPD826型的樹脂，吸附量多2.5~3mg/mL，解吸率高8~10%，故本發明將HPD722型大孔樹脂作為最優選擇。