[發(fā)明專利]三疣梭子蟹Pacifastin型絲氨酸蛋白酶抑制劑蛋白的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410724321.6
• 申請日: 2014-12-03
• 公開（公告）號: CN104491851A
• 公開（公告）日: 2015-04-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉媛;崔朝霞;王雙艷;師國慧
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院海洋研究所
• 主分類號: A61K38/57
• 分類號: A61K38/57;A23K1/16;A23L3/3526;A23B7/154;A61P31/04
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體的說是一種三疣梭子蟹Pacifastin型絲氨酸蛋白酶抑制劑蛋白(PtPLC)的應(yīng)用。

背景技術(shù)

絲氨酸蛋白酶抑制劑是對絲氨酸蛋白酶有抑制活性的一類蛋白質(zhì)，其通過與靶酶相互結(jié)合形成穩(wěn)定的復(fù)合體，來防止機(jī)體內(nèi)絲氨酸蛋白酶的有害水解激活，是生物體內(nèi)免疫系統(tǒng)的重要組成部分。根據(jù)序列特征、拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)和功能的相似性，絲氨酸蛋白酶抑制劑可以被分為74個家族，但在蝦蟹等甲殼動物中其結(jié)構(gòu)和功能的報道較少。

Pacifastin是一類新的絲氨酸蛋白酶抑制劑家族，最初是1987年在淡水螯蝦Pacifastus?leniusculus的血淋巴中被發(fā)現(xiàn)。研究表明該基因只存在于節(jié)肢動物中，目前已經(jīng)在多種昆蟲中發(fā)現(xiàn)Pacifastin相關(guān)基因，但在甲殼動物中只在淡水螯蝦和中華絨螯蟹中發(fā)現(xiàn)。淡水螯蝦的Pacifastin由兩條肽鏈構(gòu)成，重鏈和輕鏈，其中輕鏈含有一個典型的半胱氨酸排列模式Cys-Xaa_9-12-Cys-Asn-Xaa-Cys-Xaa-Cys-Xaa_2-3-Gly-Xaa_3-4-Cys-Thr-Xaa₃-Cys(Pacifastin?l?ight?chain?domain,PLD)。PLD結(jié)構(gòu)域?qū)acifastin的結(jié)構(gòu)和功能至關(guān)重要。

三疣梭子蟹(Portunus?trituberculatus)是我國重要的海水養(yǎng)殖品種，但隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大以及養(yǎng)殖集約化程度的不斷提高，由細(xì)菌、真菌和病毒等引起的各種病害日趨嚴(yán)重，給三疣梭子蟹養(yǎng)殖業(yè)造成巨大損失。因此，開展三疣梭子蟹免疫防疫基礎(chǔ)研究，為蟹病的防治尋找更科學(xué)有效的途徑，通過提高蟹自身免疫抵抗力來防止和減少蟹病的發(fā)生，是實現(xiàn)其健康養(yǎng)殖的可靠保障。

到目前為止，未有關(guān)于三疣梭子蟹Pacifastin型絲氨酸蛋白酶抑制劑的報道。因此，研究免疫因子—Pacifastin對理解三疣梭子蟹的免疫防御機(jī)制和進(jìn)行病害防治無疑具有十分重要的理論與實踐意義，同時將有助于開發(fā)天然藥物用于人類疾病的治療。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種三疣梭子蟹Pacifastin型絲氨酸蛋白酶抑制劑蛋白的應(yīng)用。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種三疣梭子蟹Pacifastin型絲氨酸蛋白酶抑制劑蛋白PtPLC的應(yīng)用，所述三疣梭子蟹PtPLC重組表達(dá)產(chǎn)物用于制備抗菌藥物、免疫增強(qiáng)劑、飼料添加劑、防腐劑或保鮮劑。

所述三疣梭子蟹PtPLC重組表達(dá)產(chǎn)物用于制備酚氧化酶抑制劑藥物或革蘭氏陰性菌的抑菌藥物。

所述革蘭氏陰性菌為溶藻弧菌或銅綠假單胞菌。

所述三疣梭子蟹PtPLC重組表達(dá)產(chǎn)物按照常規(guī)方式獲得，具體氨基酸序列如下所示，

MRGSHHHHHHGMASELALTSPPFVELPSDPDAPECEGRPLVDRWRKDCNWCSCNEGRVRCSRQLCPEGQQDPEPQCEGSPTWKDDCNTCRCAGGRAVCTAKHCDQLGPEQQIVEVQVESAECKEGSRWRVECNWCTCRGGKGACTEMACLNWDEDQAREDGILECHGSSRWKKDCNWCRCAEGRGFCTKKACPQTGPFDNLPEDATCVPGSRWLVDCNWCGCSDDGRSSFCTLMACIPGYVHEGPTCEDGSVWKTDDCNICRCIDGMSACTKRLCATPN

本發(fā)明所具有的優(yōu)點：

本發(fā)明利用三疣梭子蟹PtPLC重組表達(dá)蛋白濃度為2.28、4.56、9.11μM時，在反應(yīng)40min時，對三疣梭子蟹血細(xì)胞破碎裂解液酚氧化酶的抑制活性達(dá)到18.95-72.75％。重組蛋白PtPLC對處于對數(shù)生長期和平穩(wěn)期(4-10h)的溶藻弧菌具有明顯的抑制效果，與陰性對照組相比，達(dá)到了顯著差異水平(P<0.05)。重組蛋白PtPLC對處于對數(shù)生長期(3-4，6-7h)的銅綠假單胞菌具有明顯的抑制效果，與陰性對照組相比，達(dá)到了顯著差異水平(P<0.05)。

本發(fā)明基因及其重組蛋白可作為酚氧化酶類抑制劑藥物的生產(chǎn)，應(yīng)用于人類相關(guān)疾病的治療，或用于飼料添加劑、防腐劑或保鮮劑的生產(chǎn)等，另外還可以為進(jìn)一步研究三疣梭子蟹免疫防御機(jī)制提供基礎(chǔ)，并為三疣梭子蟹的病害防治和基因輔助選育提供參考。

附圖說明