[發明專利]卡那霉素適配體親和柱的制備方法

有效

• 申請號: 201410724019.0
• 申請日: 2014-12-04
• 公開（公告）號: CN104383718A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發明（設計）人: 廖且根;羅林廣;胡麗芳;王冬根
• 申請（專利權）人: 江西省農業科學院農產品質量安全與標準研究所
• 主分類號: B01D15/38
• 分類號: B01D15/38;B01J20/281;G01N1/34
• 代理公司: 江西省專利事務所 36100
• 代理人: 胡里程

1.一種卡那霉素適配體親和柱的制備方法，其步驟：（1）?活化：取60mg的環氧活化瓊脂糖微球FF在2.0mL去離子水中懸浮溶脹成凝膠1小時，用60mL去離子水分三次洗滌凝膠，靜置5min后，移除清洗液；（2）?偶聯：將氨基修飾的卡那霉素適配體溶于1mL20.0mmol/LpH10.0的磷酸鹽緩沖液中，將步驟（1）溶脹凝膠懸浮于含適配體的緩沖液中，在37℃的水浴中振搖16小時，反應完后，再用3mL去離子水洗滌未反應的適配體，靜置5min后，移除清洗液；（3）?封閉：將步驟（2）凝膠懸浮到2mL1mol/LpH8.0乙醇胺溶液中，在50℃的水浴中振搖4小時，反應完后，用3mL含0.5mol/LNaCl的0.1mol/LpH4.0乙酸緩沖液和3mL含0.5mol/LNaCl的pH8.3偶聯緩沖液交替清洗，每次清洗2min，至少循環3次；（4）?裝柱：將步驟（3）的懸浮凝膠液移入固相萃取小柱，避免產生氣泡，用5mL0.1mol/LpH8.0磷酸鹽緩沖液平衡小柱。

2.根據權利要求1所述卡那霉素適配體親和柱的制備方法，其特征在于：其中步驟（2）中氨基修飾的卡那霉素適配體為DNA合成公司商品化生產，?卡那霉素適配體的序列為：5'-?TGG?GGG?TTG?AGG?CTA?AGC?CGA?TTT?TTT?-NH2-3'。

3.根據權利要求1所述卡那霉素適配體親和柱的制備方法，其特征在于：本發明卡那霉素適配體親和柱的應用方法，按下述步驟進行：（a）上樣：放掉柱內溶液，將提取的樣品用0.1mol/LpH8.0磷酸鹽緩沖液溶解或稀釋，上樣，上樣時流速不超過1mL/min，避免樣品流干；（b）淋洗：待樣品過柱后，用3?mL去離子水淋洗柱床、棄去；（c）洗脫：用3mL甲醇洗脫，在50℃下氮氣吹干，用流動相定容待測；（d）再生：對于使用之后的凝膠，以2~3倍柱體積的含0.5mol/LNaCl的0.1mol/LpH8.3Tris-HCl和含0.5mol/LNaCl的0.1mol/pH4.5乙酸緩沖液交替沖洗2~3次。