[發(fā)明專利]一種利用外周血分離培養(yǎng)免疫細(xì)胞的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410718862.8
• 申請(qǐng)日: 2014-11-28
• 公開（公告）號(hào): CN104480069A
• 公開（公告）日: 2015-04-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳海佳;王一飛;葛嘯虎;應(yīng)杰;羅二梅;王小燕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州賽萊拉干細(xì)胞科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/078
• 分類號(hào): C12N5/078
• 代理公司: 廣州圣理華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44302
• 代理人: 頓海舟;陳業(yè)勝

1.一種利用外周血分離培養(yǎng)免疫細(xì)胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將外周血在2000rpm、4℃條件下離心10min，收集上層血漿，配制成含血漿的無血清培養(yǎng)基，其中血漿的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為5％；

(2)將下層血細(xì)胞和生理鹽水按照體積比1:2～2:1混合后，加入Ficoll分離液，混合液與Ficoll分離液的體積比為1:2～2:1，離心力為700g，離心20～40min；

(3)吸取白膜層，洗滌，即得到PBMC；

(4)在PBMC中加入無血清培養(yǎng)基，使細(xì)胞密度為5×10⁵～20×10⁵/ml，重懸細(xì)胞沉淀，接種于無血清培養(yǎng)基，并添加20～300U/mL?IL-2和5～50ng/mL?IL-15；

(5)當(dāng)細(xì)胞密度大于2×10⁶/ml時(shí)，添加無血清培養(yǎng)基，使細(xì)胞密度保持為5-10⁵/ml～1×10⁶/ml，補(bǔ)加20～300U/mL?IL-2和5～50ng/mL?IL-15；培養(yǎng)第13～15天，收集免疫細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述洗滌是用生理鹽水洗滌兩次。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述白膜層在離心后的上清液的從上往下數(shù)的第二層。