[發明專利]一種用于檢測MC-LR型微囊藻毒素的生物電極傳感器及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201410713946.2
• 申請日: 2014-11-28
• 公開（公告）號: CN104407039A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發明（設計）人: 施曉文;蘇曉明;曹發;劉桂亭
• 申請（專利權）人: 青島海佑海洋生物工程有限公司
• 主分類號: G01N27/48
• 分類號: G01N27/48;G01N27/327
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 蘇雪雪

1.一種用于檢測MC-LR型微囊藻毒素的生物電極傳感器，其特征在于，所述生物電極傳感器是在絲網印刷電極的工作電極修飾上多壁碳納米管-殼聚糖電沉積薄膜，并在多壁碳納米管-殼聚糖電沉積薄膜的表面進一步交聯上MC-LR型微囊藻毒素抗體。

2.根據權利要求1所述的一種用于檢測MC-LR型微囊藻毒素的生物電極傳感器，其特征在于，所述絲網印刷電極是標準三電極，PET基底，工作電極是碳(直徑3mm)，對電極是碳，參比電極是銀/氯化銀。

3.一種制備如權利要求1或2所述的用于檢測MC-LR型微囊藻毒素的生物電極傳感器的方法，其特征在于，具體制備步驟如下：

(1)將殼聚糖(CS)溶于0.5％的稀鹽酸溶液中，室溫條件下磁力攪拌40min，再進行抽濾得到1.0wt％的殼聚糖溶液；

(2)將多壁碳納米管加入到步驟(1)中所得的殼聚糖溶液中，室溫條件下磁力攪拌3h，初步得到多壁碳納米管分散的殼聚糖溶液，其中多壁碳納米管的濃度為0.5mg/mL；

(3)將步驟(2)中所得的多壁碳納米管分散的殼聚糖溶液超聲10min，進一步得到均勻分散的多壁碳納米管-殼聚糖溶液，用1.0wt％的氫氧化鈉溶液調節此混合溶液的pH值為4.0～6.0；

(4)將絲網印刷電極(SP)浸入到步驟(3)中所得的多壁碳納米管-殼聚糖溶液中，進行電沉積，電沉積電壓為-1.5～-3.0V，沉積時間為20～300s，形成多壁碳納米管-殼聚糖電沉積薄膜，再用超純水洗滌得到初步修飾電極(CS-MWCNTs/SP)；

(5)將步驟(4)中制得的CS-MWCNTs/SP電極浸入到1.0wt％的戊二醛溶液中0.5～1h；

(6)將步驟(5)中所得修飾后的CS-MWCNTs/SP電極用超純水洗滌，在其工作電極上滴加5～25μL?MC-LR型微囊藻毒素抗體溶液(anti-MC-LR)，室溫條件下靜置交聯0.5～3h，即得到目標檢測(anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP)電極傳感器。

4.一種檢測MC-LR型微囊藻毒素的方法，其特征在于，使用了如權利要求1-3任一項所述的生物電極傳感器。

5.根據權利要求4所述的一種檢測MC-LR型微囊藻毒素的方法，其特征在于，具體步驟如下：

(1)制備標準HRP酶標微囊藻毒素溶液：將不同濃度的微囊藻毒素溶液(MC-LR)分別與微囊藻毒素HRP酶標物溶液(HRP-MC-LR)以等體積混合，得到一系列標準HRP酶標微囊藻毒素混合溶液(MC-LR+HRP-MC-LR)，其混合液中MC-LR的濃度是0.0、0.3、0.8、1.0、2.0ppb；

(2)將生物電極傳感器(anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP)用超純水洗滌，再分別滴加5～25μL步驟(1)中所制備的MC-LR+HRP-MC-LR溶液，在室溫條件下孵育0.5～3h，得到具有不同濃度MC-LR的修飾電極：MC-LR+HRP-MC-LR/anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP；

(3)分別測試步驟(2)中孵育后的MC-LR+HRP-MC-LR/anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP電極的電流值Ip；

(4)繪制MC-LR濃度與Ip的標準曲線；

(5)將待測的微囊藻毒素溶液(MC-LR)與微囊藻毒素HRP酶標物溶液(HRP-MC-LR)以等體積混合，取5～25μL混合液滴加到超純水洗滌過的生物電極傳感器(anti-MC-LR/CS-MWCNTs/SP)上，室溫條件下孵育0.5～3h，測試孵育后電極的電流值Ip；結合步驟(4)繪制的標準曲線即可得到待測樣品溶液中微囊藻毒素的濃度。

6.根據權利要求5所述的一種檢測MC-LR型微囊藻毒素的方法，其特征在于，步驟(3)中測試電流值Ip的方法為：測試工作液為含有2mM對苯二酚(HQ)、1mM雙氧水(H2O2)的0.05M?PBS(pH＝7.0)緩沖液，電化學檢測方法為微分脈沖伏安法。