[發明專利]一種從富含多糖多酚類的植物材料中提取RNA的方法

在審

• 申請號: 201410710291.3
• 申請日: 2014-11-27
• 公開（公告）號: CN104357439A
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發明（設計）人: 劉海燕;梁炫強
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院作物研究所
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉

1.一種從富含多糖多酚類的植物材料中提取RNA的方法，其特征在于包括以下操作步驟：

(1)取富含多糖多酚類的植物材料0.5～1g，放入經液氮預冷的研缽中，加入液氮充分研磨至粉末狀，加入500μL～1000μL提取bufferA，旋渦振蕩后，室溫條件下平放；

(2)再加入150～300μL提取bufferB，充分顛倒混勻；離心，轉移上清至另一離心管中；

(3)向上清中加入上清0.7～1.0倍體積的異丙醇，充分混勻；離心，棄上清，保留沉淀；

(4)沉淀用500～1000μL含20ug/mlDNaseI的水溶解，37℃處理5～10min；

(5)重復步驟(3)，所得沉淀用800μL～1000μL體積百分比濃度70％的乙醇洗滌，用移液器吸去多余的乙醇，室溫干燥，得到RNA沉淀；

(6)用30μL?TE溶液溶解所得的RNA沉淀，于-20℃保存，備用；

所述提取bufferA由以下組分組成：100mM的pH值為8.0的Tris-HCl，50mM的pH值為8.0的EDTA，500mM的NaCl，以及每100ml?bufferA中含有2克SDS，每100ml?bufferA中含有2mlβ-巰基乙醇；

所述提取buffer?B為濃度為5M的醋酸鉀。

2.根據權利要求1所述的一種從富含多糖多酚類的植物材料中提取RNA的方法，其特征在于：步驟(2)所述提取buffer?B在使用之前于4攝氏度保存。

3.根據權利要求1所述的一種從富含多糖多酚類的植物材料中提取RNA的方法，其特征在于：步驟(1)所述旋渦振蕩的時間為20～30秒；所述平放的時間為5～10min。

4.根據權利要求1所述的一種從富含多糖多酚類的植物材料中提取RNA的方法，其特征在于：步驟(2)所述混勻的時間為20～30秒；所述離心是以10000～12000rpm的轉速離心5～10min。

5.根據權利要求1所述的一種從富含多糖多酚類的植物材料中提取RNA的方法，其特征在于：步驟(3)所述離心是以10000～12000rpm的轉速離心5～10min。

6.根據權利要求1所述的一種從富含多糖多酚類的植物材料中提取RNA的方法，其特征在于：步驟(5)所述洗滌的次數為2～3次；所述室溫干燥的時間為5～10min。