[發明專利]雙波長酶免疫化學發光底物及其應用

有效

• 申請號: 201410709518.2
• 申請日: 2014-11-28
• 公開（公告）號: CN104391110A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發明（設計）人: 劉軍;田恩江;張靜;李小永
• 申請（專利權）人: 天津華信康達科技有限公司;張靜;李小永
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531
• 代理公司: 北京中企鴻陽知識產權代理事務所(普通合伙) 11487
• 代理人: 劉葛;郭鴻雁

技術領域

本發明涉及一種利用化學發光來測試或分析材料的組合物及其應用，特別是涉及一種雙波長免疫化學發光底物及其應用。?

背景技術

化學發光免疫分析(chemiluminescence?immunoassay,CLIA)是將具有高靈敏度的化學發光測定技術與高特異性的免疫反應相結合的分析方法，用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測分析，也是繼放射免疫分析、酶聯免疫分析、時間分辨熒光免疫分析之后發展起來的一項最新免疫測定技術，廣泛應用于醫學臨床檢驗等領域中。?

化學發光免疫分析包含兩個部分,即免疫反應系統和化學發光分析系統。免疫反應系統是將發光物質或酶直接標記在抗原或抗體上(免疫標記物)，再與相應的抗原或抗體特異性結合，作用于底物發光。免疫標記物作用于底物發光是利用化學發光物質經催化劑的催化和氧化劑的氧化,形成一個激發態的中間體,當這種激發態中間體回到穩定的基態時,同時發射出光子(hM),利用發光信號測量儀器測量光量子產額，根據光量子的數量，可對待測物質進行高靈敏度和特異性的定量。?

化學發光免疫分析已成為當今世界和我國醫學臨床檢驗中必備的分析方法之一，其化學發光酶免疫分析底物的研制引起國內外的廣泛關注。?

目前，我國醫學臨床上，應用的化學發光免疫分析儀器和其診斷試劑，基本來自于國外，如德國的羅氏(Roche)、美國的貝克曼(Beckman)、德國的西門子(Siemens)、德國的索林(Liaison)、美國的雅培(Abbott)、日本的東曹(AIA)等，雖化學發光免疫分析診斷試劑的底物各異，但其價格均較昂貴，特別是日本東曹(AIA)的化學發光酶(堿性磷酸酶)免疫分析診斷試劑的基質液(底物)一套(200ml)約需3000元左右，其基質液是雙波長底物(專利保密)。雙波長底物即在底物中除含有能發出待測的特異性激發熒光物，還加入能發出非特異性激發熒光參照物，以消除非特異性激發熒光等其它干擾，降低儀器讀數帶來的誤差，保證實驗數據的準確性，雙波長底物具有靈敏度高、穩定、可重復性強等特點。?

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種制備方法簡單、使用方便，樣品檢測準確性和精密度高，成本低、保存時間長的雙波長酶免疫化學發光底物及其應用。?

本發明雙波長酶免疫化學發光底物，包括兩部分：A組分和B組分；其中，所述A組分按以下步驟制備：將5g甘露醇和60mg?4-甲基傘形酮磷酸酯加入10mL的0.01mol/L、PH?9.5的碳酸鹽緩沖液中，混勻后進行真空冷凍干燥，即制得A組分，4℃保存；所述B組分按以下步驟制備：將4.5ml?2-氨基-2-甲基-1-丙醇、30mg?5-羥色胺、20mg?MgCl₂.6H₂O和100mg?NaN3加入100ml的0.01mol/L、PH?9.5的碳酸鹽緩沖液，混勻，即制得B組分。?

本發明雙波長酶免疫化學發光底物中所述的4-甲基傘形酮磷酸酯(4-MUP)作為特異性激發熒光物，5-羥色胺作為發出非特異性激發熒光的參照物，甘露醇作為干燥賦形劑。?

本發明雙波長酶免疫化學發光底物的應用，用于化學發光酶免疫分析。?

本發明雙波長酶免疫化學發光底物的應用，作為化學發光酶免疫分析儀中的基質液。?

本發明雙波長酶免疫化學發光底物的應用，所述的化學發光酶免疫分析儀為日本東曹AIA化學發光酶免疫分析儀。?

本發明雙波長酶免疫化學發光底物的應用，作為日本AIA化學發光酶免疫分析中的AIA基質液，按以下步驟進行：將本發明的B組分直接加入A組分中，混均后，置于日本AIA化學發光酶免疫分析儀放基質液的位置，檢測步驟按日本AIA化學發光酶免疫分析儀說明書要求進行。?

本發明雙波長酶免疫化學發光底物的應用，作為日本AIA化學發光酶免疫分析中的AIA基質液，按以下步驟進行：?

一、在室溫條件下，將所述B組分直接加入盛放所述A組分的容器中，混均后即為基質液，室溫條件下靜置3-5分鐘；?

二、將步驟一中制得的基質液放置在日本AIA化學發光酶免疫分析儀的基質液位置上；?

三、將待測樣本和診斷試劑放在日本AIA化學發光酶免疫分析儀的指定位置上，啟動日本AIA化學發光酶免疫分析儀的自動檢測程序，進行檢測；?

四、檢測完畢，讀取結果。?