[發明專利]耐紫杉醇卵巢癌細胞模型的建立

有效

• 申請號: 201410708515.7
• 申請日: 2014-11-28
• 公開（公告）號: CN104388389A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發明（設計）人: 許國雄;張凌云
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬金山醫院
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12Q1/02;C12R1/91
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 馬偉

【技術領域】

本發明涉及細胞模型的建立，具體地說，涉及耐紫杉醇卵巢癌細胞模型的建立。

【背景技術】

卵巢癌是致女性死亡的首位生殖道惡性腫瘤，其治療主要在腫瘤細胞減滅術的基礎上紫杉醇聯合鉑類化療，此方案初治治療效果好，但易發生耐藥，而耐藥后再化療效果很差。普通卵巢癌細胞株在研究卵巢癌耐藥機制中存在局限性，而卵巢癌耐藥細胞株更能從分子生物學角度來研究其耐藥機制，有助于進一步尋找卵巢癌耐藥后的治療方法。

中國期刊《腫瘤》2006年第8期，刊出的論文“卵巢癌紫杉醇耐藥細胞株OC3/TAX300建立及基因表達譜分析”，采用反復大劑量紫杉醇沖擊法，由親本細胞OC3建立卵巢癌紫杉醇耐藥細胞株OC3/TAX300，耐藥株歷時10個月建成，耐藥性穩定，耐藥指數為6.70。

中國期刊《山東醫藥》2008年第48卷第6期，刊出的論文“卵巢癌紫杉醇耐藥細胞株的建立及其耐藥機制研究”，選用卵巢癌細胞株SKOV3，以濃度為300μg/ml的TAX反復大劑量沖擊用藥，培養8個月后建立了TAX耐藥細胞株，命名為SKOV3/TAX，該細胞已反復傳代3個月以上，結果SKOV3/TAX細胞耐藥性穩定，耐藥指數(RI)為10.57。

中國期刊《中國藥師》2008年第10期，刊出的論文“不同方法建立卵巢癌紫杉醇耐藥細胞株對臨床用藥方案的啟發”，用不同的誘導耐藥方法培養紫杉醇耐藥細胞株A2780/Taxol，A2780/(DDP+Taxol)，A2780/Taxol-1，具體方法是：采用逐步增加藥物濃度和大劑量沖擊兩種方法處理細胞，直至細胞能在2.5μg·ml^-1紫杉醇中穩定生長，MTT法檢測A2780，A2780/DDP細胞對紫杉醇的藥物半數抑制濃度(IC50)分別為(0.23±0.04)μg·ml^-1和(0.26±0.02)μg·ml^-1，采用逐步增加藥物濃度誘導法歷經九個月時間建立A2780的紫杉醇耐藥細胞株A2780/Taxol-1，對紫杉醇的IC50為(6.63±0.31)μg·ml^-1，耐藥倍數為28.83。

以上均通過逐步誘導的方法建立了耐紫杉醇卵巢癌細胞模型，然而其耐藥指數仍然較低，如果細胞模型要能用于耐藥機制等研究，則要求具備良好的耐藥穩定性。另外，目前尚無耐紫杉醇的OVCAR-3卵巢癌細胞株。

綜上所述，建立耐藥指數更高、耐藥穩定性更好的細胞模型仍然是十分必要的。

【發明內容】

本發明的第一個目的是針對現有技術中的不足，提供一種耐紫杉醇卵巢癌細胞模型的建立方法。

本發明的第二個目的是，提供一種耐紫杉醇卵巢癌細胞模型。

本發明的第三個目的是，提供所述的耐紫杉醇卵巢癌細胞模型的用途。

為實現上述第一個目的，本發明采取的技術方案是：

一種耐紫杉醇卵巢癌細胞模型的建立方法，它包括以下步驟：

a)培養OVCAR-3細胞和SK-OV-3細胞；

b)OVCAR-3細胞和SK-OV-3細胞分別用PTX開始干預，然后換無PTX培養基，至細胞生長恢復正常即細胞穩定生長、形態飽滿、無漂浮死細胞、傳代密度為30％的情況下3至5天可長至90％后再開始正常傳代并提高PTX的濃度，每次PTX的干預時間均為24小時；

c)對干預后的OVCAR-3細胞和SK-OV-3細胞進行檢測，獲得耐紫杉醇卵巢癌細胞模型。

所述的耐紫杉醇卵巢癌細胞模型的保藏號分別為CCTCC?C2014203和CCTCC?C2014204。

實現上述第二個目的，本發明采取的技術方案是：

作為本發明的一種技術方案，所述的耐紫杉醇卵巢癌細胞模型的保藏號為CCTCC?C2014203，細胞株命名為OV3R-PTX。

所述的保藏號為CCTCC?C2014203耐紫杉醇卵巢癌細胞模型可用于研究卵巢癌耐藥機制、尋找卵巢癌耐藥逆轉的靶點、篩選治療卵巢癌的藥物。

作為本發明的另一種技術方案，所述的耐紫杉醇卵巢癌細胞模型的保藏號為CCTCC?C2014204，細胞株命名為SK3R-PTX。

所述的保藏號為CCTCC?C2014204耐紫杉醇卵巢癌細胞模型可用于研究卵巢癌耐藥機制、尋找卵巢癌耐藥逆轉的靶點、篩選治療卵巢癌的藥物。

本發明優點在于：