[發明專利]從黃綠蜜環菌中提取麥角甾醇的方法及其應用

有效

• 申請號: 201410708015.3
• 申請日: 2014-11-28
• 公開（公告）號: CN105693804B
• 公開（公告）日: 2017-08-01
• 發明（設計）人: 張耀洲;馬琳;唐楚沉;顧朋嬡;李聰聰
• 申請（專利權）人: 天津耀宇生物技術有限公司
• 主分類號: C07J9/00
• 分類號: C07J9/00;A61K31/575;A61P35/00
• 代理公司: 寧波市鄞州甬致專利代理事務所(普通合伙)33228
• 代理人: 李迎春

1.一種從黃綠蜜環菌中提取麥角甾醇的方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)以黃綠蜜環菌子實體為原料，室溫陰干處理后，在40～60℃溫度下烘干脫水，然后進行超微粉碎處理，獲得超微粉；

(2)將超微粉按1g︰(6～15)mL的料液比加入分析純水，混合均勻后在60～90℃溫度下提取1～2h，提取結束后在4000～8000rpm轉速下離心，取沉淀重復1～3次，最后得到沉淀放入烘箱50～80℃干燥處理；

(3)在步驟(2)所得的干燥沉淀中按質量體積比加入1～5倍的丙酮冷浸提取3～8h，提取結束后在4000～8000rpm轉速下離心，取沉淀重復1～3次，收集所有上清液減壓濃縮至膏狀，獲得小分子提取物；

(4)在小分子提取物中按質量體積百分比加入5～10倍的正己烷-乙酸乙酯二元混合溶劑，進行超聲溶解，溶解后過有機濾膜，得到含有小分子提取物的一維上樣溶液；

(5)對一維上樣溶液進行高效液相色譜分離：采用的色譜柱為Silica正相硅膠色譜柱，采用的流動相為二元混合有機相，其中A相為正己烷，B相為乙酸乙酯，進樣量為800-1200mL/針，流動相流速為600-750mL/min，檢測器為紫外檢測器，檢測波長260nm，采用的洗脫方式為A相濃度100％等度洗脫0～15min、A相濃度60％等度洗脫15～35min、B相濃度100％等度洗脫35～60min，根據紫外吸收光譜收集25-29min洗脫液作為目的組分，減壓濃縮至膏狀，得到一維液相組分；

(6)在得到的一維液相組分中按質量體積百分比加入5～10倍的正己烷-乙酸乙酯二元混合溶劑，進行超聲溶解，溶解后過有機濾膜，得到二維上樣溶液；

(7)進行二維高效液相色譜分離：采用的色譜柱為Silica正相硅膠色譜柱，采用的流動相為二元混合有機相，其中A相為正己烷，B相為乙酸乙酯，進樣量為20-80mL/針，流動相流速為40-80mL/min，檢測器為紫外檢測器，檢測波長260nm；采用的洗脫方式為A相濃度88％等度洗脫0-45min，根據紫外吸收光譜收集27.5-36min洗脫液作為目的組分，旋轉蒸發濃縮至干，即為本發明目的化合物麥角甾醇。

2.根據權利要求1所述的從黃綠蜜環菌中提取麥角甾醇的方法，其特征在于：所述步驟(4)、(6)中正己烷-乙酸乙酯二元混合溶劑中正己烷的體積分數為50～90％。

3.根據權利要求1所述的從黃綠蜜環菌中提取麥角甾醇的方法，其特征在于：所述步驟(5)中的Silica正相硅膠色譜柱的尺寸為直徑50-150mm、柱長250mm，其中硅球粒徑為8μm，使用時柱溫為室溫或25-40℃。

4.根據權利要求1所述的從黃綠蜜環菌中提取麥角甾醇的方法，其特征在于：所述步驟(7)中的Silica正相硅膠色譜柱的尺寸為直徑50mm、柱長250mm，其中硅球粒徑為10μm，使用時柱溫為室溫或25-40℃。