[發明專利]黃綠蜜環菌中揮發油的提取方法

在審

• 申請號: 201410707855.8
• 申請日: 2014-11-28
• 公開（公告）號: CN105687255A
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發明（設計）人: 張耀洲;馬琳;唐楚沉
• 申請（專利權）人: 天津耀宇生物技術有限公司
• 主分類號: A61K36/07
• 分類號: A61K36/07
• 代理公司: 寧波市鄞州甬致專利代理事務所(普通合伙) 33228
• 代理人: 李迎春

技術領域

本發明涉及中藥提取技術領域，具體涉及一種蕈菌揮發油，尤其涉及一種黃綠蜜環菌中揮發油的提取方法。

背景技術

黃蘑菇，又稱金蘑菇、草原黃環菌、黃綠蜜環菌。其風味獨特，是一種優良的野生食用與藥用真菌，也是一種重要的高原生物資源，在青海祁連被稱為祁連“八寶”之一。野生黃蘑菇子實體子肥厚，味道鮮美、滑脆爽口，具有特殊的香味，且營養豐富，含豐富的蛋白質、氨基酸、維生素、礦物質、生物堿、揮發油和多糖等營養成分，還含有少量有機酸、黃酮、強心苷、揮發油、甾體三萜類、苷類、香豆素萜類、鞣質、酚類等化合物。特別是硒的含量很高，具有很強的抗氧化功能。研究表明黃蘑菇還具有防治神經炎、腳氣病、促進兒童發育、抗衰老、抗流感以及抗腫瘤等生物活性。

揮發油是中藥中的一類有效成分，在植物界分布廣泛，且具有多種藥理活性和廣泛的用途。隨著社會的發展，其開發和利用也日益受到有關專家和學者的關注。

公開號為101709322B的中國發明專利“生物催化白樺脂醇合成白樺脂酸的方法”公開了一種通過黃綠蜜環菌生物轉化合成白樺脂酸；公開號為101113413B的中國發明專利“一種黃綠蜜環菌纖溶酶及其生產方法”公開了一種利用黃綠蜜環菌代謝合成纖溶酶的方法；公開號為100999750B的中國發明專利“一種微生物細胞生物轉化對羥基苯甲醇合成天麻素的方法”公開了一種利用黃綠蜜環菌生物轉化合成天麻素的方法。上述中國專利文件中關于黃蘑菇子實體的研究，主要集中在生物轉化上，并未涉及黃蘑菇揮發油的提取工藝，對其化學成分的研究甚少。周勁松等對黃綠蜜環菌子實體乙醚提取揮發油進行了測定，但此方法存在需樣量大、耗時長、對人體易造成傷害等缺陷。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對以上現有技術的不足，提供一種黃綠蜜環菌中揮發油的提取方法，該方法采用固相萃取法結合GC-MS分析能快速、準確測定該揮發油中的化學成分，克服了傳統樣品處理技術的缺點，具有成本低、所需樣品少、靈敏度高、準確性強等優點。

本發明所采用的技術方案為：

一種黃綠蜜環菌中揮發油的提取方法，該方法包括以下步驟：

(1)樣品預處理：取黃蘑菇子實體為原料，超微粉碎成粉末狀，然后加入丙酮，冷浸1～3小時，并定時攪拌，然后過濾取濾液進行離心，取離心后的上清液用旋轉蒸發儀進行濃縮，溫度控制在50℃，再用氮吹儀進一步濃縮，直至得到黃棕色油狀物；

(2)固相萃取處理：將得到的黃棕色油狀物溶解在正己烷-乙酸乙酯二元混合溶劑中，其中黃棕色油狀物與正己烷-乙酸乙酯二元混合溶劑的體積比為1︰9，形成樣品液，在正相硅膠柱上進行固相萃取，先用5倍柱體積的正己烷活化固相萃取柱，3倍柱體積的正己烷平衡，然后上樣品液，上樣量為柱體積的1/20，再用3倍柱體積的正己烷淋洗樣品，收集色譜圖上有峰形部分的洗脫液，即為本發明黃蘑菇揮發油提取物。

作為優選，所述步驟(1)中黃蘑菇與丙酮的質量體積比(g︰mL)為1︰(5～15)。

作為優選，所述步驟(2)中正己烷-乙酸乙酯二元混合溶劑的正己烷與乙酸乙酯的體積比為2︰1。

作為優選，所述步驟(2)中正相硅膠柱的填料粒徑80μm。

本發明得到的黃蘑菇揮發油提取物為有濃郁蘑菇氣味的棕黃色油狀液體，易溶于脂溶性溶劑。將該黃蘑菇揮發油提取物進行氣相色譜-質譜(GC-MS)檢測，共鑒定出34種化合物，占總提取物含量的98.91％，主要由脂肪酸類、酯類、烯類等化合物組成，其中亞油酸含量最高，達48.16％，其他主要成分為順式-11-十八碳烯酸(7.086％)、鄰苯二甲酸單(2-乙基己基)酯(7.264％)、棕櫚酸(4.106％)、E-14-十六烯醛(3.283％)、E-3-二十烯(3.020％)、反式-13-十八碳烯酸(2.641％)、1-二十二烯(2.066％)等。該黃蘑菇揮發油提取物中主要揮發性成分是脂肪酸，包括不飽和脂肪酸亞油酸(48.155％)和飽和脂肪酸棕櫚酸(4.106％)。34種化合物的具體名稱見下表1。

與現有技術相比，本發明具有以下優點和顯著效果：本發明采用固相萃取(液相色譜)，相比于現有技術的冷卻回流，工藝簡單，所需樣品量少，靈敏度高，檢測速度快，更為省時，重復性更好，準確度也更高，檢測結果可以準確地反映黃蘑菇丙酮提取物揮發油的化學成分，并便于計算相對含量，進行定性和定量分析。

附圖說明