[發明專利]包埋法固定大腸桿菌谷氨酸脫羧酶的方法在審
| 申請號： | 201410707748.5 | 申請日： | 2014-11-27 |
| 公開（公告）號： | CN104531662A | 公開（公告）日： | 2015-04-22 |
| 發明（設計）人： | 金京勛 | 申請（專利權）人： | 蘇州嘉禧蘿生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N11/10 | 分類號： | C12N11/10 |
| 代理公司： | 無 | 代理人： | 無 |
| 地址： | 215011 江蘇省*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 包埋 固定 大腸桿菌 谷氨酸 脫羧酶 方法 | ||
1.一種包埋法固定大腸桿菌谷氨酸脫羧酶的方法，其特征在于，包括如下步驟：
步驟(1)海藻酸鈉載體制備：將海藻酸鈉用甘油浸潤，然后加入去離子水，攪拌溶解后，加入聚乙二醇辛基苯基醚、聚乙二醇、二硫蘇糖醇，攪拌溶解；
步驟(2)將谷氨酸脫羧酶酶液加入步驟(1)制備的海藻酸鈉溶液，二者混合均勻，得到海藻酸鈉酶溶液；
步驟(3)用恒流泵外接注射器針頭將海藻酸鈉酶以低于1ml/min的速度滴入到3％-6％CaCl2中，15-25℃條件下攪拌2-4小時；
步驟(4)過濾，用pH為5.6-7.0的PBS緩沖液反復洗滌凝膠沉淀，15℃-25℃干燥，得到粒狀固定化谷氨酸脫羧酶。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中的海藻酸鈉溶液中，甘油的終濃度為10-20％，聚乙二醇辛基苯基醚的終濃度為1-2％，聚乙二醇的終濃度為0.5-1％，二硫蘇糖醇的終濃度為0.1-1mM，海藻酸鈉的終濃度為3.5％-5％。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中的海藻酸鈉溶液中，甘油的終濃度為15％，聚乙二醇辛基苯基醚的終濃度為1.5％，聚乙二醇的終濃度為0.75％，二硫蘇糖醇的終濃度為0.5mM，海藻酸鈉的終濃度為4％。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述谷氨酸脫羧酶酶的比活大于等于100U/mg。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述CaCl2的濃度為5％。
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)的最適溫度為25℃，步驟(4)的最適溫度為20℃。
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