[發明專利]一種谷氨酸脫羧酶的保存液

無效

• 申請號: 201410707603.5
• 申請日: 2014-11-27
• 公開（公告）號: CN104357432A
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發明（設計）人: 金京勛
• 申請（專利權）人: 蘇州嘉禧蘿生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及酶的保存領域，尤其涉及一種谷氨酸脫羧酶的保存液，屬于生物工程領域。

背景技術

γ-氨基丁酸(GABA)存在于哺乳動物腦、脊髓中，是一種抑制性神經傳遞物質，由谷氨酸脫羧酶(谷氨酸脫羧酶)催化谷氨酸得到。GABA具有調節血壓與心律、營養神經細胞、促進精神安定、促進腦部供血、促進長期記憶、促進激素分泌、腎功能活化等作用。

γ-氨基丁酸的生產基本采用化學合成、植物富集法和生物合成法。其中生物合成法利用谷氨酸脫羧酶催化谷氨酸底物生成γ-氨基丁酸，可用于生產γ-氨基丁酸。

谷氨酸脫羧酶可以利用生物工程的方法獲得高表達谷氨酸脫羧酶的工程菌、擴大培養，然后通過下游分離純化技術獲得高純度高比活的谷氨酸脫羧酶產品。但是谷氨酸脫羧酶作為蛋白質，室溫條件下容易變性失活，無法長期保存。因此，如何采用有效的手段延長其在室溫條件下的保存期限是獲得谷氨酸脫羧酶后需要解決的技術問題。

目前，常采用酶的固定化將谷氨酸脫羧酶固定于特定載體以增加其耐熱性和耐酸堿性等穩定性能。固定化酶主要為催化劑采用填充床反應器或其他方式連續制備γ-氨基丁酸。作為制備固定化酶催化劑的前體，液體谷氨酸脫羧酶仍存在長期保存的問題，待解決。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供一種谷氨酸脫羧酶的保存液，在本發明公布的保存液配方中，谷氨酸脫羧酶可在4℃保存1-2個月活性基本不丟失。

本發明所采用的技術方案如下：

一種谷氨酸脫羧酶的保存液，該保存液的成分和重量百分比或摩爾濃度為：

50mM磷酸鹽緩沖液，pH6.0

甘油50％

乙二胺四乙酸0.1％-1％

聚山梨酯0.1％-0.2％

NaCl?50-100mM

乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸二鈉鹽1-2mM

山梨醇5％-10％

蔗糖和或海藻糖，其中蔗糖10％-20％，海藻糖5％-10％

優選的，本發明公布的保存液中乙二胺四乙酸的含量為0.1％。

優選的，本發明公布的保存液中聚山梨酯的含量為0.1％。

優選的，本發明公布的保存液中山梨醇的含量為7.5％。

優選的，本發明公布的保存液中蔗糖的含量為15％。

優選的，本發明公布的保存液中還包括0.01％-0.05％疊氮鈉或0.1％-0.2％麝香草酚。

優選的，本發明公布的保存液中還包括蛋白酶抑制劑。

優選的，本發明公布的保存液中蛋白酶抑制劑為抗痛素和或抑肽酶。

優選的，本發明公布的保存液中抗痛素的濃度為50μg/mL。

優選的，本發明公布的保存液中抑肽酶的濃度為1-2μg/mL。

本發明的有益效果是：1、保存液中含有對谷氨酸脫羧酶有特別保護效果的蔗糖和海藻糖，有效提高了谷氨酸脫羧酶的熱穩定性；2、谷氨酸脫羧酶長期保存中活力的丟失的一個主要原因是由微生物污染引起的，在保存液中增加抑菌劑或防腐劑，能有效避免保存液中或酶液中存在的微量微生物因從長期保存帶來的活力丟失問題；3、蔗糖、海藻糖和山梨醇亦能穩定液體環境中的谷氨酸脫羧酶，減緩或預防其發生有害的蛋白聚集；4、酶液中蛋白酶的存在是另一個引起酶活力丟失的原因，適當添加蛋白酶抑制劑能避免或延緩這一過程的發生；5、同時，在50％甘油中添加的蔗糖、海藻糖、山梨醇以及氯化鈉，能有效降低保存液冰點，避免因低溫保存環境中溫度的驟升驟降帶來的活力損傷。

具體實施方式

下面結合具體的實施例對本發明作進一步的說明，但并不局限如此。

實施例一

本實施例中保存液配方如下：

50mM磷酸鹽緩沖液，pH6.0，甘油50％，乙二胺四乙酸0.1％，聚山梨酯0.1％，NaCl?50mM，乙二胺四乙酸二鈉鹽1mM，山梨醇5％，蔗糖10％，海藻糖10％，疊氮鈉0.05％，抗痛素50μg/mL。

配置方法：按比例稱量磷酸鈉和磷酸氫二鈉，甘油，乙二胺四乙酸，聚山梨酯，NaCl，乙二胺四乙酸二鈉鹽，山梨醇，蔗糖，海藻糖，疊氮鈉，混合均勻后HCl調pH至6.0，121℃滅菌30min；冷卻至室溫后加入抗痛素，混合均勻后4℃保存備用。整個配液過程無菌操作。

實施例二

本實施例中保存液配方如下：