[發明專利]草木犀藥材指紋圖譜的構建方法及其標準指紋圖譜

在審

• 申請號: 201410704954.0
• 申請日: 2014-11-28
• 公開（公告）號: CN105699564A
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發明（設計）人: 張丹;馮彩麗;徐江平
• 申請（專利權）人: 舒泰神(北京)生物制藥股份有限公司;北京舒泰神新藥研究有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司 11243
• 代理人: 許靜;黃燦

技術領域

本發明涉及本發明涉及中藥材指紋圖譜的構建方法，尤其是草木犀藥材高 效液相色譜(HPLC)指紋圖譜的構建方法及其標準指紋圖譜。本發明屬于藥 物分析技術領域。

背景技術

中藥指紋圖譜特指中藥樣本經光譜或色譜等現代分析技術得到的中藥各 組分群體特征的圖譜或圖像。中藥指紋圖譜作為一種綜合的、可量化的質量控 制手段，可提供比單一指標成分更全面的信息。目前，美國FDA、英國草藥 典、印度草藥典、德國藥用植物學會、加拿大藥用植物協會等均接受指紋圖譜 的指控方法，中國藥品監督管理局也頒發了《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術 要求(暫行)》。中藥材、中成藥指紋圖譜技術已經成為牽動行業全面進步、帶 動中藥現代化、推動中藥走向世界的關鍵技術之一。

草木犀，又寫作草木樨，為豆科植物草木犀屬(MelilotusMill.)一年生或 二年生草本。以全草入藥，生于沙丘、山坡、草原、海邊，分布于我國大部分 省區，又名辟漢草、省頭草、野苜蓿及鐵掃把，目前栽培的多為白花草木犀和 黃花草木犀。黃花草木犀由于其自身的生長優勢和化學成分適宜，在中國被用 作很好的香料原料。民間以葉、花制成軟膏，用作外用藥，或煎服用于治療浮 腫、腹痛、瘧疾等證。

本專利中提供了一種草木犀藥材指紋圖譜的構建方法，該方法簡單、快速、 有效。

發明內容

本發明提供一種草木犀藥材指紋圖譜的構建方法，以及由此方法得到的草 木犀標準指紋圖譜。所述方法前處理比較簡單，并且獲得的指紋圖譜出峰數目 多，各峰分離度較好，在線分析時間短，構成了草木犀藥材的指紋特征，可作 為草木犀藥材的標準指紋圖譜。

本發明的草木犀藥材高效液相色譜指紋圖譜的構建方法，包括如下步驟：

1)稱取草木犀藥材粉末，加入體積百分濃度為30～70％的甲醇水溶液， 超聲震蕩提取，將提取液過濾得到濾液，即得到待測溶液；

2)將步驟1)獲得的待測溶液進行高效液相色譜分析，用十八烷基硅烷鍵 合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以質量百分濃度為0.05～0.2％磷酸水溶 液為流動相B，進行線性梯度洗脫得到草木犀藥材的指紋圖譜，其中，流速為 0.8～1.2ml/min；

檢測波長為275nm。

所述方法中，所述步驟2)中梯度洗脫程序以如下體積比濃度配置進行：

，即所述步驟2)中梯度洗脫程序如下:

梯度1：第0-5min進行等度洗脫，流動相A的體積百分濃度為3～10％， 流動相B的體積百分濃度為97～90％；

梯度2：第5-45min進行線性梯度洗脫，流動相A的體積百分濃度由3～10％ 線性增至22～25％，流動相B的體積百分濃度由97～90％線性降至78～75％；

梯度3：第45-60min進行線性梯度洗脫，流動相A的體積百分濃度由22～25％ 線性降至3～10％，流動相B的體積百分濃度由78～75％線性升至97～90％。

在本發明一個技術方案中，所述步驟2)中梯度洗脫程序以如下體積比濃 度配置進行：

，即所述步驟2)中梯度洗脫程序如下:

梯度1：第0-5min進行等度洗脫，流動相A的體積百分濃度為3％，流動 相B的體積百分濃度為97％；

梯度2：第5-45min進行線性梯度洗脫，流動相A的體積百分濃度由3％ 線性增至22％，流動相B的體積百分濃度由97％線性降至78％；

梯度3：第45-60min進行線性梯度洗脫，流動相A的體積百分濃度由22％ 線性降至3％，流動相B的體積百分濃度由78％線性升至97％。

所述方法中，所述步驟2)中十八烷基硅烷鍵合硅膠為YMCJ'sphere ODS-M80、YMC-PackODS-A或AgilentEclipsePlusC18；流動相B為質量百 分濃度為0.1％的磷酸水溶液；流速為1.0ml/min。

在本發明一個技術方案中，所述步驟2)中所述高效液相色譜分析的柱溫 25～45℃，優選為30℃。