[發(fā)明專(zhuān)利]PRV抗體檢測(cè)系統(tǒng)及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410704424.6
• 申請(qǐng)日: 2014-11-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104459121A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-03-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 田克恭;王瑩
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 洛陽(yáng)普萊柯萬(wàn)泰生物技術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/569
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 北京華夏正合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營(yíng)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于獸用生物制品領(lǐng)域，具體地涉及一種檢測(cè)PRV抗體的檢測(cè)系統(tǒng)及其制備方法。

背景技術(shù)

偽狂犬病(Pseudorabies,PR)，又稱(chēng)Aujeszky氏病，是由偽狂犬病病毒(Pseudorabies?virus,PRV)引起的包括家畜和多種野生動(dòng)物的一種以發(fā)熱、奇癢及腦脊髓炎為癥狀的高度接觸性、急性傳染病。豬是該病的天然宿主和儲(chǔ)存者，不僅可引起妊娠母豬的流產(chǎn)，甚至產(chǎn)死胎、弱胎和木乃伊胎，還可引發(fā)新生仔豬發(fā)熱、神經(jīng)癥狀，甚至衰竭死亡，死亡率可達(dá)100％。自1902年首次在美國(guó)發(fā)現(xiàn)以來(lái)，豬偽狂犬病已在全球范圍內(nèi)流行，給世界養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，成為嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的重大傳染病之一。

PRV屬皰疹病毒科(Herpesviridae)α皰疹病毒亞科，為雙鏈線形DNA，150kb左右，目前已鑒定含11種糖蛋白：gB、gC、gD、gE、gG、gH、gI、gK、gL、gM、gN，大部分糖蛋白是構(gòu)成病毒囊膜的成分(郭廣君.豬偽狂犬病病毒野毒與基因缺失疫苗株鑒別檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用.吉林大學(xué)博士學(xué)位論文)。

在偽狂犬病的防治工作中，監(jiān)測(cè)和檢測(cè)豬血清中偽狂犬病病毒抗體的水平是非常重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。國(guó)際獸醫(yī)局(International?Epizootic?office,OIE)推薦的檢測(cè)方法包括：血清中和試驗(yàn)(SN)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)等。ELISA是應(yīng)用最為廣泛的檢測(cè)方法，目前，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上主要應(yīng)用的是國(guó)外進(jìn)口的以PRV全病毒、gB蛋白或gE蛋白為包被原而制備的抗體檢測(cè)試劑盒，其中,gB-ELISA僅檢測(cè)gB抗體(鄒浩勇，陳冬煥，熊金鳳等.偽狂犬病毒中和抗體與gB-ELISA抗體阻斷率之間的相關(guān)性.豬業(yè)科學(xué),2008,5:94-96)。為了加強(qiáng)對(duì)該病的疫情監(jiān)測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查，有必要研發(fā)出一種特異性強(qiáng)、敏感性高且價(jià)格便宜的血清學(xué)檢測(cè)試劑盒。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種豬偽狂犬病抗體檢測(cè)試劑盒，該試劑盒具有種特異性和免疫原性的特點(diǎn)，檢測(cè)率高，特異性強(qiáng)。

本發(fā)明的第一方面在于提供一種PRV抗體檢測(cè)系統(tǒng)，其中，所述檢測(cè)系統(tǒng)包被抗原為PRV的gB、gC和gD抗原中的任意兩種或三種蛋白。

術(shù)語(yǔ)“豬偽狂犬病病毒抗原性蛋白”是指含有天然性豬偽狂犬病病毒的抗原性蛋白，包括但不限于豬偽狂犬病病毒的gB蛋白、gC蛋白、gD蛋白，針對(duì)該抗原性蛋白產(chǎn)生的免疫效應(yīng)是所尋求的目的。

術(shù)語(yǔ)“豬偽狂犬病病毒”包括豬偽狂犬病病毒經(jīng)典株和豬偽狂犬病病毒變異株，所述豬偽狂犬病病毒變異株又稱(chēng)為高致病性豬偽狂犬毒株，是指表現(xiàn)為任何年齡的豬都會(huì)感染，可在豬群水平傳播，潛伏期短(1-2天)，發(fā)病率在10％-100％之間，發(fā)病豬死亡率在10％-100％之間(仔豬死亡率可高達(dá)100％)，感染后可引起豬只高熱(40-42℃，持續(xù)3日以上)，呼吸困難，腹瀉，喘，咳嗽，打噴嚏，后肢麻痹，犬坐，突然倒地，抽搐，側(cè)臥不起，角弓反張，泳狀劃水，最后衰竭而死，并可引起種公豬精液質(zhì)量下降，懷孕母豬流產(chǎn)(高達(dá)35％)，早產(chǎn)，死胎，弱仔(弱仔14日齡前全部死亡)等繁殖障礙癥狀，優(yōu)選地，所述的偽狂犬變異株為經(jīng)分離的所述豬偽狂犬病毒變異株當(dāng)重現(xiàn)所述豬偽狂犬病毒變異株感染時(shí)，免疫了現(xiàn)有技術(shù)中基因缺失偽狂犬弱毒疫苗后依然會(huì)造成豬出現(xiàn)高熱，精神沉郁，食欲下降或廢絕等癥狀的毒株。

術(shù)語(yǔ)“gB蛋白”又稱(chēng)gII蛋白，為豬偽狂犬病病毒的糖蛋白之一，其大小約2.8kb，編碼913個(gè)氨基酸(包新奇，黃紹華，劉巧榮等.豬偽狂犬病毒gB基因在大腸桿菌中的分段表達(dá).中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志,2012,22(3):12–16)。

術(shù)語(yǔ)“gC蛋白”又稱(chēng)gIII蛋白，為豬偽狂犬病病毒的糖蛋白之一，編碼約487個(gè)氨基酸(王鍵義.豬偽狂犬病病毒gC基因的克隆及生物信息學(xué)分析.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文)。

術(shù)語(yǔ)“gD蛋白”又稱(chēng)gp50蛋白，為豬偽狂犬病病毒的糖蛋白之一，編碼402個(gè)氨基酸(王鍵義.豬偽狂犬病病毒gC基因的克隆及生物信息學(xué)分析.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文)。

作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，所述檢測(cè)系統(tǒng)還包括酶標(biāo)板、樣品稀釋液、洗滌液、HRP標(biāo)記的抗豬IgG、底物顯色液、終止液、陽(yáng)性豬血清對(duì)照以及陰性豬血清對(duì)照。