[發明專利]骨肉瘤的生物標記物及其應用

有效

• 申請號: 201410699583.1
• 申請日: 2014-11-27
• 公開（公告）號: CN104372007B
• 公開（公告）日: 2017-12-22
• 發明（設計）人: 王大平;張巨峰
• 申請（專利權）人: 深圳市第二人民醫院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/68
• 代理公司: 深圳中一專利商標事務所44237
• 代理人: 張全文

技術領域

本發明屬于分子生物檢測技術領域，具體涉及一種骨肉瘤的生物標記物及其應用。

背景技術

骨肉瘤是骨惡性腫瘤中最多見的一種，是從間質細胞系發展而來，腫瘤迅速生長是由于腫瘤經軟骨階段直接或間接形成腫瘤骨樣組織和骨組織。下肢負重骨在外界因素(如病毒)的作用下，使細胞突變，可能與骨肉瘤形成有關。

現有在骨肉瘤影響預后的因素關鍵在于早診斷，術后血清堿性磷酸酶增加的變化觀察。現有的診斷均基于早期發現血液中骨源性堿性磷酸酶增高，與該腫瘤的成骨作用有關而進行；檢測的手段多采用Gomori鈣鈷法、偶氮偶聯法、堿性磷酸酶染色試劑盒法，檢測骨源性堿性磷酸酶的表達水平。但是，酶的表達依然存在滯后性，且檢測時酶的含量會隨著組織分離出現變化，而與原始基體中的表達的含量有差異，而無法最真實準確地反應骨肉瘤的情況。

發明內容

本發明實施例的目的在于克服現有技術的上述不足，提供一種骨肉瘤的生物標記物novel-miR-14及其應用。

為了實現上述發明目的，本發明實施例的技術方案如下：

一種骨肉瘤的生物標記物，所述生物標記物為具有序列表SEQ.ID.No.1堿基序列的novel-miR-14。

本發明的生物標記物novel-miR-14，其相比現有的其它的骨肉瘤診斷的生理指標上，其可以在更早的時間獲得骨肉瘤病變是否發生，且其還能根據novel-miR-14表達的水平，評估骨肉瘤的惡性程度，具有更好的時間優勢和準確性。

本發明進一步提出一種上述骨肉瘤的生物標記物在骨肉瘤檢測中的應用。采用本發明的上述應用基于方法基于novel-miR-14表達水平進行，其表達含量可以用于骨肉瘤的診斷分析，通過檢測出于基因的突變和病變伊始，基于novel-miR-14表達水平的檢測可以利于骨肉瘤更早的發現；且檢測的結果更具準確性。

附圖說明

下面將結合附圖及實施例對本發明作進一步說明，附圖中：

圖1為本發明實施例檢測的骨肉瘤組織和正常組織的novel-miR-14表達水平結果對照圖；

圖2為本發明實施例檢測的骨肉瘤組織的不同惡性程度中novel-miR-14表達水平對照圖。

具體實施方式

為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合附圖及實施例，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。

本發明實施例提供一種用于骨肉瘤診斷的生物標記物，其為具有序列表SEQ.ID.No.1堿基序列的novel-miR-14。

同時，基于上述生物標記物，本發明進一步還提出一種上述骨肉瘤診斷的生物標記物在骨肉瘤診斷中的應用。其具體的應用比如可以針對該生物標記物作為骨肉瘤的生理參數指標輔助診斷，具體實現可以采用如下步驟：

S10，獲取待測組織標樣；

S20，提取待測標樣的RNA；

S30，通過RT-PCR檢測待測標樣的RNA中的novel-miR-14表達水平。

本發明的上述方法基于novel-miR-14表達水平的差異進行；其中novel-miR-14具有序列表SEQ.ID.No.1堿基序列。

在本發明中，之前先通過生物信息學分析獲取到了一些候選miRNA與骨肉瘤表達的潛在靶基因相關，同時進一步在對候選miRNA進行篩選，篩選過程中以miRNA預測的基礎數據包括通過小RNA分類注釋后未注釋到任何數據庫的但可以比對到基因組的序列、比對到內含子區域的序列以及比對到外顯子反義鏈的數據為基礎，然后以下述條件進一步進行精確篩選：

(1)候選的miRNA在基因組上的前體序列可以形成頸環結構，并且其成熟體序列位于前體的臂上；

(2)前體折疊后miRNA/miRNA*復合體兩端有2nt的懸掛；

(3)前體臂上無較大的泡，同時沒有較多的凸起；

(4)前體折疊后總體的最小自由能應不大于-18kcal/mol；

(5)預測到前體的成熟體序列的比對結果中最小支持數應大于等于5。

預測到的新的miRNA表達譜構建，針對預測到的miRNA其表達量的計算是根據比對結果，序列與成熟體序列在兩端不超過3nt的錯配，中間需完全匹配，符合這樣條件的序列的表達量加和作為該miRNA的表達量，之后確定骨肉瘤的分子生物標記物novel-miR-14。