[發明專利]一種山羊角活性多肽的制備方法

在審

• 申請號: 201410699022.1
• 申請日: 2014-11-23
• 公開（公告）號: CN104531813A
• 公開（公告）日: 2015-04-22
• 發明（設計）人: 林波;于秀玲;王欣;孔新穎;韓風雨
• 申請（專利權）人: 內蒙古天奇生物科技有限公司;內蒙古天奇中蒙制藥股份有限公司;內蒙古天奇藥業投資(集團)有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K14/47;C07K1/34
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供一種山羊角活性多肽的制備方法，其包括以下步驟：(1)山羊角清洗；(2)粉碎；(3)山羊角蛋白提取；(4)酶解；(5)過濾；(6)濃縮干燥，即得；其中步驟(4)中所采用的酶解方式是加入酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶。所得產品呈淡黃色固體粉末，易于溶解，且溶解速度較快。經取樣、分析測試后，多肽含量達75.00％以上，所得山羊角活性多肽可應用于生物醫藥等領域。

技術領域

本發明屬于山羊角蛋白深加工技術領域，涉及一種利用蛋白酶酶解山羊角蛋白制備山羊角活性多肽的方法。

背景技術

山羊角為牛科動物青羊(naemorhedus goral Hardwicke)、北山羊(capira ibexLinnaeus)的角。其首載于《本草新編》，日其：“專活死血”。山羊角主要成分為蛋白質、磷酸鈣及微量的磷脂類成分和不溶性無機鹽等。因山羊角主要成分與羚羊角類似，其功用近似羚羊角，可作羚羊角的代用品。近年來，研究發現山羊角具有明顯的鎮靜、鎮痛、解熱、抗驚厥和抗病毒作用，同時對心血管及平滑肌亦有作用。山羊角在內蒙地區廣為存在，但大部分山羊角因未得到充分利用被廢棄，造成資源的浪費，同時給環境帶來了嚴重的污染。

目前，國內外關于山羊角深入加工利用的報導并不多見，大多將山羊角作為羚羊角的替代品添加于中藥制劑中具有鎮痛解熱作用，還有部分山羊角經打磨拋光后作為擺件、一些道具的原料等，而山羊角中豐富的蛋白資源并未得到充分的利用，造成角蛋白資源的浪費。

山羊角蛋白是一種硬化、不易溶解的蛋白質，其中既含有酸性基(羧基-COOH)，又含有堿性基(胺基--NH2、亞胺基＝NH)，所以山羊角蛋白對酸、堿、鹽、氧化劑、還原劑、鹵素等都有一定的不穩定性。山羊角蛋白質的大分子之間主要通過二硫鍵建立起穩定的結合，從而構成不溶的蛋白質。可見，制取山羊角蛋白溶液，使其溶解的關鍵是使分子鏈間的二硫鍵斷裂。從現狀看，國內外對山羊角蛋白的再生利用的研究還處在初級階段，在高附加值應用研究上，工藝還不夠成熟，角蛋白工業化應用還有一定的距離。隨著人們變廢為寶觀念的深入，開展了對各種廢棄資源回收利用的研究，探索一條經濟、高效、實用性強、應用價值高的山羊角蛋白利用途徑是對當前山羊角蛋白提取及應用的迫切需求。

因此，尋求一種處理山羊角蛋白、提高其應用價值進而達到變廢為寶、避免環境污染是人們的一種客觀需要。為了解決上述問題，本發明提供了一種山羊角多肽的制備方法。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種山羊角多肽及其制備方法，其包括以下步驟：

(1)山羊角清洗；(2)粉碎；(3)山羊角蛋白提取；(4)酶解；(5)超濾；(6)干燥。

其中，步驟(1)中采用轉鼓清洗機對挑揀后山羊角進行清洗，山羊角與水的質量比為1∶2，轉鼓清洗時間30min，重復清洗4遍；

步驟(2)中清洗后山羊角晾曬后采用粉碎機粉碎；

步驟(3)中采用雙氧水和氫氧化鈉溶液處理提取山羊角蛋白：稱取山羊角粉碎粉，加入20倍(w/v)濃度為15％(v/v)的H2O2，80℃下攪拌處理1h至山羊角粉碎粉完全溶解；趁熱過濾，將所得濾液在30℃-40℃下濃縮；向濃縮后濾液中加入山羊角粉20倍(w/v)1.0mol/L的氫氧化鈉溶液，45℃條件下攪拌處理3h得山羊角蛋白粗溶液；將山羊角粗溶液進行過濾、透析(10000-15000分子量的透析袋)并濃縮后得山羊角蛋白溶液；采用冰醋酸調節山羊角蛋白溶液pH值至角蛋白等電點pH＝4-5左右使角蛋白沉淀析出；采用離心機以離心處理去除上層清液，低溫烘干得山羊角蛋白粉末。

步驟(4)中酶解方式為加入酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶，酸性蛋白酶的用量為山羊角蛋白重量的1.0‰-2.0‰，優選為1.5‰。木瓜蛋白酶的用量為山羊角蛋白重量的1.0‰-2.0‰，優選為1.5‰。