[發(fā)明專(zhuān)利]一種糞便細(xì)菌的保存液

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410699015.1
• 申請(qǐng)日: 2014-11-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104480012A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-04-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何彥;周宏偉;尹恝
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 南方醫(yī)科大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/04
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/04
• 代理公司: 北京市誠(chéng)輝律師事務(wù)所 11430
• 代理人: 朗堅(jiān)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種糞便細(xì)菌的保存液。

背景技術(shù)

人腸道中生存著10萬(wàn)億到100萬(wàn)億個(gè)細(xì)菌，分屬數(shù)百到上千個(gè)不同的種屬，其數(shù)量為人體細(xì)胞數(shù)量的10倍，基因數(shù)量是人體基因數(shù)量的150-200倍。這些共生在人體腸道中的微生物是人體一大“未發(fā)現(xiàn)的”器官，更有學(xué)者認(rèn)為人本身就是人體細(xì)胞和細(xì)菌共同組合而成的共生生物體。它們與人體共生，以人體攝入的食物以及腸道分泌物為食，合成必須氨基酸，維生素，短鏈脂肪酸等重要物質(zhì)進(jìn)入人體，促進(jìn)宿主健康；相反，其中一些病原菌也分泌有害物質(zhì)進(jìn)入體內(nèi)，損害宿主的健康。由于腸道菌群的復(fù)雜和多樣性，人類(lèi)對(duì)其結(jié)構(gòu)多樣性和功能重要性一直缺乏足夠的認(rèn)知。直至近幾年，隨著第二代測(cè)序等技術(shù)的進(jìn)步，微生物組的黑盒才得以打開(kāi)，并借助無(wú)菌動(dòng)物的驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)了腸道微生物與大量的疾病直接相關(guān)，甚至在許多疾病中扮演了病因的角色。并且，其中大量的疾病，例如肥胖，糖尿病，動(dòng)脈粥樣硬化，炎癥性腸炎等都是高發(fā)病率重要公共衛(wèi)生問(wèn)題。

由于腸道微生物寄居在人的腸道內(nèi)，因此最便捷，也是目前采用的最主要的方式是研究人體排出的糞便的微生物，以此代表大腸內(nèi)的共生微生物。糞便采集之后，通過(guò)提取細(xì)菌的總DNA，擴(kuò)增核糖體16S?rRNA可變區(qū)，測(cè)序，以及一系列生物信息學(xué)分析，可以了解糞便中的細(xì)菌構(gòu)成，進(jìn)一步研究其和人體健康疾病之間的關(guān)系。

由于糞便離體后，其環(huán)境也發(fā)生了變化，例如無(wú)氧環(huán)境轉(zhuǎn)變成有氧環(huán)境，其中提供微生物代謝的能量來(lái)源也進(jìn)入只消耗而不補(bǔ)充的狀態(tài)。與此同時(shí)，其中的部分細(xì)菌還保持了活性，繼續(xù)代謝和生長(zhǎng)，而由于環(huán)境的變化，不同細(xì)菌其增長(zhǎng)與死亡的速率已經(jīng)不同于排便前。因此，需要對(duì)糞便進(jìn)行一些保存措施，盡量將其中微生物的構(gòu)成穩(wěn)定在剛剛離體時(shí)的狀態(tài)，從而最好的代表大腸中的共生微生物。目前采用的保存方法為采集糞便后立即凍存在-20℃或者更低的溫度中。由于細(xì)菌在低溫狀態(tài)下代謝速率極大的降低，因此可以在一段時(shí)間內(nèi)維持糞便中細(xì)菌的構(gòu)成。

就其效果而言，凍存在-20℃或者更低的溫度中是可以在一段時(shí)間內(nèi)(一周以上)保持糞便內(nèi)的細(xì)菌構(gòu)成不發(fā)生顯著的變化。然而其最大的缺陷則是凍存條件在某些時(shí)候無(wú)法實(shí)現(xiàn)，例如采樣者外出，采得的糞便需要攜帶一段時(shí)間才可以拿回實(shí)驗(yàn)室凍存，或者采樣者與實(shí)驗(yàn)室并不在同一地點(diǎn)，需要采樣后通過(guò)快遞等方式寄送到實(shí)驗(yàn)室后才可以?xún)龃妫谶@個(gè)過(guò)程中，微生物的構(gòu)成可能已經(jīng)發(fā)生了改變。然而目前國(guó)內(nèi)并沒(méi)有任何技術(shù)來(lái)解決這一問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明涉及一種糞便保存液的配方，按照配方所述配置保存液，將采集的糞便直接置于保存液中，無(wú)需凍存，即可達(dá)到穩(wěn)定其中微生物構(gòu)成的作用。使用該配方保存糞便樣本可以在常溫下達(dá)到凍存糞便樣本的效果，從而使采樣者在任何時(shí)候都可以進(jìn)行采樣和樣品的保存，也能夠用于糞便樣本的長(zhǎng)途運(yùn)輸。

本保存液配方(配方1)如下：

表1.保存液配方

異硫氰酸胍(Guanidine?Thiocyanate)0.47％EDTA-二鈉(EDTA?Na2)1.86％