[發明專利]抗chMDA5蛋白單克隆抗體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201410697397.4
• 申請日: 2014-11-26
• 公開（公告）號: CN104450626A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 張瑞莉;葛銘;王成成;李廣興;劉超男;欒亞男;趙霞
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/40;G01N33/577;G01N33/573;G01N33/569
• 代理公司: 北京康思博達知識產權代理事務所(普通合伙) 11426
• 代理人: 余光軍;李霞

技術領域

本發明涉及雜交瘤細胞株及由其分泌的單克隆抗體，尤其涉及抗chMDA5蛋白單克隆抗體以及分泌該單克隆抗體的雜交瘤細胞株，本發明進一步涉及該單克隆抗體在檢測雞黑色素瘤分化相關基因5(chicken?melanoma?differentiation?associated?gene?5,chMDA5)蛋白或傳染性法氏囊病病毒(infection?bursal?disease?virus，IBDV)感染以及將其作為實驗工具研究chMDA5蛋白在雞組織細胞的分布定位、表達變化以及在IBDV感染過程中的作用等方面的應用，屬于模式識別受體MDA5蛋白的檢測領域。

背景技術

機體的天然免疫系統在抵抗病毒感染方面發揮著重要作用。病毒感染宿主細胞后，宿主細胞可以通過模式識別受體(pattern?recognition?receptors，PRR)識別病原相關分子模式(pathogen?associated?molecule?patterns，PAMP)，從而區別病原生物與機體自身(AKIRA?S,UEMATSU?S,TAKEUCHIA?O.Pathogen?recognition?and?innate?immunity[J].Cell,2006,124(4):783-801.)。RIG-I樣受體(RIG-I?like?receptors,RLRs)是一類新發現的能夠特異性識別細胞質中病毒dsRNA的模式識別受體，黑色素瘤分化相關基因5(melanoma?differentiation?associated?gene?5,MDA5)是RLRs家族成員之一，屬于DExD/H?box?RNA解旋酶，可表達于病毒感染的各種細胞。MDA5含有兩個天冬酰胺富集域樣的結構域(CARD-like結構域)，能夠識別進入胞質中的dsRNA，通過銜接蛋白分子即IFN-β啟動子激活因子1(IFN-β-promoter?stimulator?1,IPS1)啟動特異性的信號通路，激活促炎癥因子基因和I型干擾素基因(NF-κB和IRF₃)，誘導干擾素和促炎癥細胞因子的產生(KATO?H,TAKEUCHI?O,STOA?S,et?al.Differential?roles?of?MDA5and?RIG-I?helicases?in?the?recognition?of?RNA?viruses[J].Nature,2006,441(7089):101-105.TAKEUCHI?O,AKIRA?S.MDA5/RIG-I?and?virus?recognition[J].Curr?Opin?Immunol,2008,20(1):17-22.)。最新研究發現，在雞細胞內是MDA5活化介導IFN-β的合成分泌而發揮抗病毒作用(LERINIG?M,SUMMERFIELD?A,ZIMMER?G,et?al.Chicken?cells?sense?influenza?A?virus?infection?through?MDA5and?CARDIF?signaling?involving?LGP2[J].J?Virol,2012,86(2):705-717.)。然而，模式識別受體表達是一把雙刃劍，一方面可以通過誘導先天性和獲得性免疫反應抑制病毒復制并最終清除病毒感染，另一方面又可以誘導組織細胞損傷，促進病毒的擴散。