[發(fā)明專利]一種從次等紫菜中同時(shí)提取藻紅蛋白和紫菜硫酸多糖的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410697186.0
• 申請(qǐng)日: 2014-11-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104447967A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-03-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王廣策;牛建峰;馮建華;何林文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南通中國(guó)科學(xué)院海洋研究所海洋科學(xué)與技術(shù)研究發(fā)展中心;中國(guó)科學(xué)院海洋研究所
• 主分類號(hào): C07K14/405
• 分類號(hào): C07K14/405;C07K1/18;C07K1/16;C08B37/00
• 代理公司: 蘇州華博知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32232
• 代理人: 何蔚

1.一種從次等紫菜中同時(shí)提取藻紅蛋白和紫菜硫酸多糖的方法，其特征在于，從新鮮次等紫菜中先提取藻紅蛋白，再?gòu)奶崛×嗽寮t蛋白的殘?jiān)刑崛∽喜肆蛩岫嗵牵淮翁崛∵^(guò)程中同時(shí)提取藻紅蛋白和紫菜硫酸多糖。

2.按權(quán)利要求1所述的從次等紫菜中同時(shí)提取藻紅蛋白和紫菜硫酸多糖的方法，其特征在于，具體步驟如下：

A.藻紅蛋白提取

(1)將新鮮次等紫菜切碎，放入1％磷酸鹽緩沖液使其細(xì)胞溶脹破裂；

(2)離心，收集上清液，得到藻紅蛋白粗提液，加入固體硫酸銨至終濃度為0.5M；

(3)將藻紅蛋白粗提液泵入Phenyl-Sepharose柱，清洗去除雜蛋白；

(4)依次用硫酸銨溶液、蒸餾水從Phenyl-Sepharose柱洗脫藻紅蛋白；

(5)將步驟(4)中所得的洗脫液分別加入DEAE-Sepharose離子交換柱，先分別用50mM、100mM磷酸鹽緩沖液、10mM醋酸鈉、4mM醋酸洗柱，然后用含NaCl的磷酸鹽緩沖液洗脫，即得純化的藻紅蛋白；

B.從殘?jiān)刑崛∽喜肆蛩岫嗵?/p>

(1)利用提取藻紅蛋白后剩余的殘?jiān)?0倍體積1％磷酸鹽緩沖液、pH6.0酸度下，控制溫度在110～121℃，提取1小時(shí)，紗布過(guò)濾；向?yàn)V渣中加入5倍體積的1％磷酸鹽緩沖液，重復(fù)上述操作，再次進(jìn)行提取、過(guò)濾；然后合并兩次濾液，得到多糖粗提液；將多糖粗提液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮；

(2)向濃縮后的多糖粗提液中加入乙醇，收集沉淀，冷凍干燥，得到紫菜硫酸多糖干粉。

3.按權(quán)利要求2所述的一種從紫菜中同時(shí)提取藻紅蛋白和紫菜硫酸多糖的方法，其特征在于，步驟A(2)中的離心是在轉(zhuǎn)速為9000～11000g、溫度為5～10℃條件下離心10分鐘。

4.按權(quán)利要求2所述的一種從紫菜中同時(shí)提取藻紅蛋白和紫菜硫酸多糖的方法，其特征在于，步驟A(4)是依次用0.20、0.10、0.05M硫酸銨溶液、蒸餾水以3～5ml/min的速度從Phenyl-Sepharose柱洗脫藻紅蛋白。

5.按權(quán)利要求2所述的從紫菜中同時(shí)提取藻紅蛋白和紫菜硫酸多糖的方法，其特征在于，步驟A(5)中所述的用含NaCl的磷酸鹽緩沖液洗脫，是依次用含0.15M?NaCl的50mM磷酸鹽緩沖液、含0.20M?NaCl的50mM磷酸鹽緩沖液、含0.2M?NaCl的100mM磷酸鹽緩沖液洗脫。

6.按權(quán)利要求2所述的一種從紫菜中同時(shí)提取藻紅蛋白和紫菜硫酸多糖的方法，其特征在于，步驟B(2)是加入4倍體積的乙醇進(jìn)行沉淀。