[發明專利]一種利用普朗尼克F127和甘薯莖篩選殺線蟲劑的方法

有效

• 申請號: 201410697113.1
• 申請日: 2014-11-26
• 公開（公告）號: CN104483447A
• 公開（公告）日: 2015-04-01
• 發明（設計）人: 王容燕;陳書龍;李秀花;高波;馬娟
• 申請（專利權）人: 河北省農林科學院植物保護研究所
• 主分類號: G01N33/00
• 分類號: G01N33/00
• 代理公司: 北京修典盛世知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11424
• 代理人: 胡長遠

技術領域

本發明屬于農藥篩選方法領域，具體涉及一種利用普朗尼克F127和甘薯莖篩選殺線蟲劑的方法。

背景技術

植物線蟲是農業生產的主要病原物之一，每年給世界農業生產造成的經濟損失約1000億美元。植物線蟲的防治方法包括抗病品種、輪作、水淹、曝曬、生物防治等(Roland?N.P.等.Plant?Nematology，CABI?Publishing.2013.)，但化學防治依然是快速、經濟有效的防治方法，深受農民的青睞。

傳統的殺線蟲劑篩選多以秀麗小桿線蟲(Caenorhabditis?elegans)為測試對象，評價供試藥劑對該線蟲的毒力(Ohba?K等.Journal?of?Pesticide?Science,1984,9:91-96)。目前商品化的殺線蟲劑均是以該篩選模式進行初篩獲得的，在初篩的基礎上進一步以植物寄生線蟲為測試對象，分別以浸漬法、盆栽法以及田間試驗等進行復篩與驗證。

殺線蟲劑對線蟲的作用方式有多種(Kearn?J等.Pesticide?Biochemistry?and?Physiology.2014)，但由于線蟲的抗逆性較強，對藥劑多不敏感，一般情況下殺線蟲劑對線蟲的致死作用較差，殺線蟲劑主要通過抑制卵孵化、抑制線蟲遷移、控制線蟲侵入、抑制線蟲發育等復合作用來達到控制線蟲的目的(鄒雅新等.河北農業大學學報,2011,34(5):78-81)。浸漬法是篩選殺線蟲劑的主要方法，也是我國測試殺線蟲劑生物活性的標準方法(NY/T?1833.1-2009)。但浸漬法僅能夠測試藥劑對線蟲的致死作用，而無法評價藥劑對線蟲卵的抑制作用、以及對線蟲活動能力、侵入能力的作用，因此浸漬法會造成對線蟲具有活性物質的漏篩。

普朗尼克F127(英文名稱：Pluronic?F127，化學式為：(C₃H₆O.C₂H₄O)x，又名嵌段式聚醚、聚醚、環氧丙烷與環氧乙烷共聚物、聚氧乙烯聚氧丙烯、聚乙二醇接枝聚丙二醇、泊洛沙姆、聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物、泊洛沙姆407等)在醫學、制藥以及化妝領域均有廣泛的應用。20％～25％的普朗尼克F127在低溫環境下呈液態，在常溫下成半固態。由于該基質透明，線蟲可在該基質內自由活動，適宜用于線蟲行為研究(Ko?M.P.等.Journal?of?Nematology,1988,20:478-485)。Ohba?K等認為普朗尼克F127是適宜替代瓊脂觀察線蟲行為的基質(Ohba?K等.Journal?of?Pesticide?Science,1984,9:91-96)；Congli等利用該基質研究番茄、擬南芥等植物對根結線蟲的吸引活性(Congli?W等,Nematology,2009,Vol.11(3),453-464；Ko?M.P.等.Journal?of?Nematology,1988,20:478-485)。

經檢索，沒有發現利用普朗尼克F127進行殺線蟲劑篩選的研究報道。

發明內容

針對現有的篩選殺線蟲劑方法中存在的容易造成漏篩的問題，本發明目的在于提供一種利用普朗尼克F127和甘薯莖篩選殺線蟲劑的方法。

為實現上述目的，本發明的技術方案如下：

一種利用普朗尼克F127和甘薯莖篩選殺線蟲劑的方法，包括如下步驟：

(1)、按照質量百分比為20～40％的比例將普朗尼克F127放入蒸餾水中，置于0～6℃低溫下過夜溶解，得普朗尼克F127母液；

(2)、用蒸餾水將馬鈴薯腐爛莖線蟲(Ditylenchus?destructor?thorne)配制成10～1000頭/mL的液體，得線蟲液；

(3)、依據待測藥劑的極性用丙酮或水將待測藥劑溶解，然后用水稀釋為質量體積比為1～20g/L的待測藥劑溶液；

(4)、用質量百分比為0.1％的吐溫80對步驟(3)所得的待測藥劑溶液進行梯度稀釋，然后和步驟(2)所得的線蟲液一起加入到步驟(1)所得的普朗尼克F127母液中，使普朗尼克F127的終濃度為18～30％(質量百分比)，使線蟲液的含量為5～100條/mL；緩慢振蕩混勻，并倒入9cm培養皿中，室溫下放置48～72h；

(5)、在培養皿中央插入長度為0.5～2.0cm的甘薯莖段，室溫下培養3～15d，然后將甘薯莖段取出，采用淺盤法分離其中的線蟲，計數；以不添加藥劑處理為對照；計算待測藥劑的防治效果，在待測藥劑的防治效果大于20％時，即說明待測藥劑在該測試濃度下對線蟲具有活性；