[發明專利]核酸擴增反應用容器、核酸擴增反應用筒及核酸擴增反應用筒試劑盒

在審

• 申請號: 201410696517.9
• 申請日: 2014-11-26
• 公開（公告）號: CN104673621A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發明（設計）人: 井手上公太郎;村山壽郎
• 申請（專利權）人: 精工愛普生株式會社
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00;C12N15/10
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 金世煜;苗堃

技術領域

本發明涉及核酸擴增反應用容器、核酸擴增反應用筒及核酸擴增反應用筒試劑盒。

背景技術

近年來，由于基因利用技術的發展，基因診斷、基因治療等利用基因的醫療備受注目。另外在農業和畜牧業領域也開發了很多使用基因鑒別品種、改良品種的方法。作為利用基因的技術，PCR(Polymerase?Chain?Reaction：聚合酶鏈式反應)等技術已廣泛普及。如今，PCR在生物體的信息解析中成為了必不可少的技術。PCR是通過對含有作為擴增對象的核酸(靶核酸)和試劑的溶液(反應液)實施熱循環以擴增靶核酸的方法。作為PCR的熱循環，普遍的是以2個梯度或3個梯度的溫度實施熱循環的方法。

另一方面，現狀是醫療領域中以流行性感冒為代表的感染癥的診斷使用免疫層析試劑盒等簡易檢查試劑盒為主流。但是這樣的簡易檢查中，有時精度不夠，希望將能夠期待更高檢查精度的PCR用于感染癥的診斷。另外，醫療機構的普通門診患者等由于診察的時間受限的關系，所以將檢查所需的時間限制在短時間內。因此，現狀是例如流行性感冒的檢查中，犧牲檢查的精度，通過簡易的免疫層析試劑盒等的檢查而實現短時間化。

鑒于上述情況，醫療領域中，為了實現利用能夠期待更高精度的PCR進行檢查，必須縮短反應所需時間。作為用于短時間內進行PCR的反應的裝置，例如專利文獻1中，公開了一種生物體試樣反應裝置，其通過使填充有反應液和不與反應液混和且比重小于反應液的液體的生物體試樣反應用芯片(chip)在水平方向的旋轉軸的周圍旋轉，從而使反應液移動而實施熱循環(專利文獻1)。另外，作為PCR的一種方法，公開了利用磁性珠的方法(專利文獻2)或使用磁性珠作為液滴的移動機構，通過使液滴在基板上的溫度變化區域移動而進行PCR的熱循環的方法(專利文獻3)等。

專利文獻1：日本特開2009－136250號公報

專利文獻2：日本特開2009－207459號公報

專利文獻3：日本特開2008－012490號公報

發明內容

本發明的目的在于提供核酸擴增反應用容器、核酸擴增反應用筒及核酸擴增反應用筒試劑盒。

本發明涉及的一個實施方式是核酸擴增反應用容器，其包含冷凍干燥的核酸擴增反應試劑、油以及收容上述核酸擴增反應試劑和上述油的容器，其中，上述核酸擴增反應試劑被保持在油中。上述油可以被脫水處理。上述冷凍干燥的核酸擴增反應試劑優選為餅狀。上述冷凍干燥的核酸擴增反應試劑優選為具有直徑20μm以下的孔的多孔質。上述核酸擴增反應試劑可以含有DNA聚合酶和dNTP，可以含有核酸擴增反應用引物，可以含有逆轉錄酶。另外，上述核酸擴增反應試劑和上述核酸擴增反應用油可以被固體蠟隔開。

本發明涉及的另一個實施方式是核酸擴增反應用筒，具有長邊方向，具備管和核酸擴增反應用容器，所述管在內部依次具備由油構成的第1塞子、由與油發生相分離且清洗結合有核酸的微粒的第1清洗液構成的第2塞子、由油構成的第3塞子、由與油發生相分離且從上述結合有核酸的微粒溶出上述核酸的溶出液構成的第4塞子、以及由油構成的第5塞子；所述核酸擴增反應用容器與上述管的配置上述第5塞子側連通且包含油，其中，與油不溶的冷凍干燥的核酸擴增反應試劑被保持在上述核酸擴增反應用容器所含的上述油中。上述核酸擴增反應試劑優選配置在上述核酸擴增反應用容器的與上述管連通側的相反側的端部。上述核酸擴增反應用容器的與上述管連通側的相反側的端部優選為錐狀。上述油的比重優選小于上述溶出液的比重，上述核酸擴增反應用容器所含的上述油的粘度優選為50cs以下。上述核酸擴增反應用筒可以具備擠壓機構，其安裝于上述管的配置第1塞子側的開口部，從上述管的配置第5塞子側向上述核酸擴增反應用容器推出液體。上述管的配置第5塞子側的前端可以與保持在上述核酸擴增反應用容器中的油相接。上述核酸擴增反應用容器中的油可以被脫水處理。上述核酸擴增反應試劑可以含有DNA聚合酶和dNTP。上述核酸擴增反應試劑可以含有核酸擴增反應用引物，或者上述溶出液可以含有核酸擴增反應用引物。上述核酸擴增反應試劑可以含有逆轉錄酶。上述核酸擴增反應試劑和油可以被固體蠟隔開。此外，用于使上述核酸擴增反應試劑冷凍干燥的核酸擴增反應試劑溶液的量可以比上述溶出液的溶液量少。

本發明涉及的另一個實施方式是核酸擴增反應用筒試劑盒，具備上述中任一個核酸擴增反應用筒和用于向上述管導入核酸結合性固相載體的罐。上述罐可以包含用于提取核酸的溶解液和上述核酸結合性固相載體。上述罐可以具有開口部，在上述開口部具有可裝卸的蓋。上述罐的開口部可以以可安裝于上述管的第1塞子側的開口部的方式構成。