[發(fā)明專利]一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201410695775.5
• 申請日: 2014-11-26
• 公開（公告）號: CN104634695A
• 公開（公告）日: 2015-05-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊朝勇;官志超;郟莎莎;朱志;劉丹;張明霞;林水潮;李久興;莊峙廈
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門大學
• 主分類號: G01N7/18
• 分類號: G01N7/18
• 代理公司: 廈門市首創(chuàng)君合專利事務(wù)所有限公司 35204
• 代理人: 張松亭

1.一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法，其特征在于，在密閉體系中，利用分子識別引入信號放大分子或粒子，通過信號放大分子或粒子催化底物釋放出氣體分子，導(dǎo)致該密閉體系氣壓增強，測量反應(yīng)檢測體系的壓強變化檢測出靶標的濃度。

2.如權(quán)利要求1所述的一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法，其特征在于：所述的分子識別包括，利用具有特異性識別功能的分子對所述靶標進行識別或標記，并通過將該識別分子將信號放大分子或粒子引入檢測體系中。

3.如權(quán)利要求2所述的一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法，其特征在于：利用分子識別技術(shù)對所述靶標進行識別或標記，所述靶標包括蛋白、核酸、肽鏈、糖類、脂類、有機小分子、無機離子、細胞、細菌或病毒中的至少一種。

4.如權(quán)利要求1所述的一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法，其特征在于：所述信號放大分子包括能夠催化底物產(chǎn)生氣體的催化劑或酶，其催化底物為受催化后產(chǎn)生氣體分子的物質(zhì)，氣體分子為底物受催化后的產(chǎn)物。

5.如權(quán)利要求4所述的一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法，其特征在于：所述的信號放大分子包括過氧化氫酶、金納米粒子、鉑納米粒子、金鉑納米粒子、錳氧化物納米粒子中的至少一種。

6.如權(quán)利要求1所述的一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法，其特征在于：在所述密閉體系中，其反應(yīng)檢測體系包括酶聯(lián)免疫吸附法體系、DNA水凝膠體系、功能化DNA傳感體系中的至少一種。

7.如權(quán)利要求6所述的一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法，其特征在于：所述酶聯(lián)免疫吸附法體系中，氣壓檢測靶標的定量檢測方法包括如下步驟：(1)根據(jù)要檢測的抗原選擇相對應(yīng)的捕獲抗體及檢測抗體；(2)對信號放大分子進行修飾，使其與檢測抗體分子偶聯(lián)結(jié)合，或使其能夠特異性的與檢測抗體結(jié)合；(3)在多孔板或磁珠或微球或其他能夠用于酶聯(lián)免疫吸附法的固相表面進行包被，加入捕獲抗體使其結(jié)合于包被后的固相表面，之后進行封閉液封閉，加入待檢測抗原，再加入檢測抗體，形成雙抗夾心結(jié)構(gòu)，洗去多余檢測抗體；(4)引入信號放大分子；(5)在多孔板中加入底物，密封反應(yīng)腔體，信號放大分子催化底物分子，生成大量氣體分子，產(chǎn)生可由氣壓計讀取的壓強變化信號；(6)根據(jù)氣壓計顯示的壓強變化數(shù)值，實現(xiàn)靶標分子的定量檢測。

8.如權(quán)利要求6所述的一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法，其特征在于：所述DNA水凝膠體系中，氣壓檢測的靶標的定量檢測方法包括如下步驟：(1)將兩條丙烯酰胺/DNA高聚鏈、一條核酸適體分子與信號放大分子混合，制備包裹有信號放大分子的核酸適體交聯(lián)水凝膠；(2)將含有不同已知濃度分析物的溶液加入上述水凝膠中，進行反應(yīng)，釋放出信號放大分子；(3)反應(yīng)結(jié)束后，取反應(yīng)上清液，置于反應(yīng)試管中，使得信號放大分子與底物發(fā)生催化反應(yīng)；密閉體系中，產(chǎn)生的大量氣體使體系內(nèi)的壓強升高，利用氣壓計進行讀數(shù)，并記錄數(shù)據(jù)，進而建立標準曲線，檢測未知樣品中靶標含量。

9.如權(quán)利要求6所述的一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法，其特征在于：所述功能化DNA傳感體系中，氣壓檢測靶標的定量檢測方法包括如下步驟：(1)針對靶標分子選擇合適的核酸適配體，在核酸適配體一段添加上與捕獲探針互補的序列；(2)根據(jù)核酸適配體的序列設(shè)計合適的檢測探針序列，使得無靶標分子存在時檢測探針能夠通過堿基之間的相互作用結(jié)合于核酸適配體鏈上，當靶標分子存在時，能夠競爭下檢測探針；(3)利用生物或化學的偶聯(lián)方法，包括脫羧反應(yīng)或生物素-親和素相互作用將捕獲探針連接在磁珠表面，加入檢測DNA以及核酸適體，使其在磁珠表面形成功能化DNA三明治雜交結(jié)構(gòu)；(4)在DNA三明治雜交體系中加入靶標，靶標與核酸適體結(jié)合，置換出三鏈結(jié)構(gòu)上的檢測探針；(5)利用磁鐵將磁珠富集，并取上清加入反應(yīng)試管中，同時加入溶液相底物，信號放大分子作用于溶液相底物，產(chǎn)生可由氣壓計讀取的信號分子；(6)根據(jù)氣壓計顯示示數(shù)，記錄檢測結(jié)果。

10.如權(quán)利要求9所述的一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法，其特征在于：利用核酸適配體與靶標分子的結(jié)合，使得靶標分子存在時能夠競爭下偶聯(lián)有信號放大分子的檢測探針，并實現(xiàn)后續(xù)的信號放大。