[發明專利]一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法

在審

• 申請號: 201410695775.5
• 申請日: 2014-11-26
• 公開（公告）號: CN104634695A
• 公開（公告）日: 2015-05-20
• 發明（設計）人: 楊朝勇;官志超;郟莎莎;朱志;劉丹;張明霞;林水潮;李久興;莊峙廈
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: G01N7/18
• 分類號: G01N7/18
• 代理公司: 廈門市首創君合專利事務所有限公司 35204
• 代理人: 張松亭

1.一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法，其特征在于，在密閉體系中，利用分子識別引入信號放大分子或粒子，通過信號放大分子或粒子催化底物釋放出氣體分子，導致該密閉體系氣壓增強，測量反應檢測體系的壓強變化檢測出靶標的濃度。

2.如權利要求1所述的一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法，其特征在于：所述的分子識別包括，利用具有特異性識別功能的分子對所述靶標進行識別或標記，并通過將該識別分子將信號放大分子或粒子引入檢測體系中。

3.如權利要求2所述的一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法，其特征在于：利用分子識別技術對所述靶標進行識別或標記，所述靶標包括蛋白、核酸、肽鏈、糖類、脂類、有機小分子、無機離子、細胞、細菌或病毒中的至少一種。

4.如權利要求1所述的一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法，其特征在于：所述信號放大分子包括能夠催化底物產生氣體的催化劑或酶，其催化底物為受催化后產生氣體分子的物質，氣體分子為底物受催化后的產物。

5.如權利要求4所述的一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法，其特征在于：所述的信號放大分子包括過氧化氫酶、金納米粒子、鉑納米粒子、金鉑納米粒子、錳氧化物納米粒子中的至少一種。

6.如權利要求1所述的一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法，其特征在于：在所述密閉體系中，其反應檢測體系包括酶聯免疫吸附法體系、DNA水凝膠體系、功能化DNA傳感體系中的至少一種。

7.如權利要求6所述的一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法，其特征在于：所述酶聯免疫吸附法體系中，氣壓檢測靶標的定量檢測方法包括如下步驟：(1)根據要檢測的抗原選擇相對應的捕獲抗體及檢測抗體；(2)對信號放大分子進行修飾，使其與檢測抗體分子偶聯結合，或使其能夠特異性的與檢測抗體結合；(3)在多孔板或磁珠或微球或其他能夠用于酶聯免疫吸附法的固相表面進行包被，加入捕獲抗體使其結合于包被后的固相表面，之后進行封閉液封閉，加入待檢測抗原，再加入檢測抗體，形成雙抗夾心結構，洗去多余檢測抗體；(4)引入信號放大分子；(5)在多孔板中加入底物，密封反應腔體，信號放大分子催化底物分子，生成大量氣體分子，產生可由氣壓計讀取的壓強變化信號；(6)根據氣壓計顯示的壓強變化數值，實現靶標分子的定量檢測。

8.如權利要求6所述的一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法，其特征在于：所述DNA水凝膠體系中，氣壓檢測的靶標的定量檢測方法包括如下步驟：(1)將兩條丙烯酰胺/DNA高聚鏈、一條核酸適體分子與信號放大分子混合，制備包裹有信號放大分子的核酸適體交聯水凝膠；(2)將含有不同已知濃度分析物的溶液加入上述水凝膠中，進行反應，釋放出信號放大分子；(3)反應結束后，取反應上清液，置于反應試管中，使得信號放大分子與底物發生催化反應；密閉體系中，產生的大量氣體使體系內的壓強升高，利用氣壓計進行讀數，并記錄數據，進而建立標準曲線，檢測未知樣品中靶標含量。

9.如權利要求6所述的一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法，其特征在于：所述功能化DNA傳感體系中，氣壓檢測靶標的定量檢測方法包括如下步驟：(1)針對靶標分子選擇合適的核酸適配體，在核酸適配體一段添加上與捕獲探針互補的序列；(2)根據核酸適配體的序列設計合適的檢測探針序列，使得無靶標分子存在時檢測探針能夠通過堿基之間的相互作用結合于核酸適配體鏈上，當靶標分子存在時，能夠競爭下檢測探針；(3)利用生物或化學的偶聯方法，包括脫羧反應或生物素-親和素相互作用將捕獲探針連接在磁珠表面，加入檢測DNA以及核酸適體，使其在磁珠表面形成功能化DNA三明治雜交結構；(4)在DNA三明治雜交體系中加入靶標，靶標與核酸適體結合，置換出三鏈結構上的檢測探針；(5)利用磁鐵將磁珠富集，并取上清加入反應試管中，同時加入溶液相底物，信號放大分子作用于溶液相底物，產生可由氣壓計讀取的信號分子；(6)根據氣壓計顯示示數，記錄檢測結果。

10.如權利要求9所述的一種基于氣壓檢測靶標的定量檢測方法，其特征在于：利用核酸適配體與靶標分子的結合，使得靶標分子存在時能夠競爭下偶聯有信號放大分子的檢測探針，并實現后續的信號放大。