[發(fā)明專利]一種鑒定水稻品種駿優(yōu)522及其親本的特異引物組合

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410693416.6
• 申請日: 2014-11-26
• 公開（公告）號: CN104357576A
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐鑫;劉學(xué)群;譚艷平;王春臺;熊杰
• 申請（專利權(quán)）人: 中南民族大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 武漢華旭知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所 42214
• 代理人: 周宗貴;劉榮

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種用于檢測三系雜交水稻品種駿優(yōu)522及其親本的特異引物組合。

背景技術(shù)

我國是世界上最大的雜交水稻種子生產(chǎn)國和消費國，具有龐大的雜交水稻種子市場。目前國內(nèi)雜交水稻年種植面積約占水稻年種植總面積的59％以上，使水稻產(chǎn)量大幅度提高，為保障我國的糧食安全做出了重要貢獻。獲得高純度的雜交種子是充分發(fā)揮雜種優(yōu)勢增產(chǎn)潛力的基礎(chǔ)。機械混雜和生物學(xué)混雜是三系雜交水稻親本雜株的主要來源。種子純度是衡量雜交水稻種子質(zhì)量的主要指標(biāo)，純度的下降將導(dǎo)致作物產(chǎn)量和質(zhì)量的明顯降低。低純度、真實性差的雜交水稻種子給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來極大損失，是種子質(zhì)檢部門、育種研究單位、制種單位和種子公司共同關(guān)心的問題。

三系雜交水稻不育系“駿1A”為本申請人自主培育的，不育系“駿1A”與恢復(fù)系“R0172”配組育成的三系雜交中稻品種“駿優(yōu)172”，以及不育系“駿1A”與恢復(fù)系“R522”配組育成的三系雜交早熟中稻品種“駿優(yōu)522”，均已通過湖北省品種審定，抗稻瘟病，米質(zhì)優(yōu)，是適合湖北省恩施州種植的農(nóng)作物新品種。

在實現(xiàn)上述研發(fā)的過程中，本申請的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)現(xiàn)有技術(shù)至少存在以下問題：

沒有鑒定三系雜交水稻品種駿優(yōu)522及其親本的特異引物，無法將上述水稻品種與其親本區(qū)分開，不能對其進行快速的種子純度分子標(biāo)記鑒定和相關(guān)的分子標(biāo)記輔助育種等工作。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種用于鑒定三系雜交水稻品種駿優(yōu)522及其親本的特異引物組合，解決了背景技術(shù)中的問題，采用該引物組合能夠快速、準(zhǔn)確的對三系雜交水稻品種駿優(yōu)522及其親本進行鑒定。

實現(xiàn)本發(fā)明上述目的所采用的技術(shù)方案為：

一種用于鑒定三系雜交水稻品種駿優(yōu)522及其親本的特異引物組合，包括包括JU01、JU02、JU03和JU04，其中JU01正向引物如序列表中SEQ?ID?NO.1：CACACACACACACACAGAGAACAG；

JU?01反向引物如序列表中SEQ?ID?NO.2：CACACACACAGAGAGGGAAAGA；

JU?02正向引物如序列表中SEQ?ID?NO.3：GGATAATCCGCATCAAGAAGAT；

JU?02反向引物如序列表中SEQ?ID?NO.4：GGTCACCCGAGAATTGCATT；

JU?03正向引物如序列表中SEQ?ID?NO.5：TGAGGCAACAATGCCTATTGCGGA；

JU?03反向引物如序列表中SEQ?ID?NO.6：TATGAGTTCACTATGTGGAGGCTC；

JU?04正向引物如序列表中SEQ?ID?NO.7：AACAATGCCCAAACTTGAGAG；

JU?04反向引物如序列表中SEQ?ID?NO.8：CGGGTCCACATGTCAGTGAG。

本發(fā)明同時還提供了根據(jù)上述引物組合來鑒定三系雜交水稻品種駿優(yōu)522及其親本的方法，步驟如下：首先提取目標(biāo)植物基因組，然后以基因組為模板，用權(quán)利要求1所述的特異引物組合進行PCR檢測。

所述的PCR反應(yīng)條件為：95℃5min；95℃變性30s，65℃退火40s，其中每個循環(huán)降低0.7℃，72℃延伸1min30s，15個循環(huán)；

94℃變性30s，55℃退火45s，72℃延伸2min，25個循環(huán)；72℃后延伸10?min。

所述的PCR反應(yīng)體系為：50ng/μl的DNA模板0.8μl，10×PCR緩沖液1μl，2.5mMdNTPs?0.8μl，10μM正、反向引物各0.2μl，DNA聚合酶0.5U，ddH₂O補足至10μl。

本發(fā)明還提供了一種含有上述特異引物組合的檢測試劑盒。

上述試劑盒能夠在鑒定三系雜交水稻品種駿優(yōu)522及其親本的純度以及輔助其育種中進行應(yīng)用。

本發(fā)明根據(jù)能鑒定三系雜交水稻品種駿優(yōu)522及其親本的ISSR引物擴增序列設(shè)計引物，通過PCR擴增，可以快速從其他水稻品種中鑒定三系雜交水稻品種駿優(yōu)522及其親本。本發(fā)明提供的三系雜交水稻品種駿優(yōu)522及其親本的鑒定方法，可用于上述水稻品種的純度鑒定，進而在輔助其育種中進行應(yīng)用。

附圖說明

圖1為本實施例中通過PCR反應(yīng)在水稻中的擴增結(jié)果圖A；

圖2為本實施例中通過PCR反應(yīng)在水稻中的擴增結(jié)果圖B。

具體實施方式