[發明專利]阿法替尼及其異構體的檢測方法

有效

• 申請號: 201410692721.3
• 申請日: 2014-11-25
• 公開（公告）號: CN104391058A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發明（設計）人: 楊麗珍;羅勇峰;楊鳳智
• 申請（專利權）人: 廣東東陽光藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟;楊晞

技術領域

本發明涉及阿法替尼及其異構體雜質的一種HPLC分離檢測方法，屬于制藥技術領域。

背景技術

阿法替尼(Afatinib)，化學名為(2E)-4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-6-{[4-(N,N-二甲基氨基)-1-氧代-2-丁烯-1-基]氨基}-7-((3S)-四氫呋喃-3-基氧基)-喹唑啉；是表皮生長因子受體(EGFR)和人表皮生長因子受體2(HER2)酪氨酸激酶的不可逆抑制劑，其二馬來酸鹽已經被批準用于治療晚期非小細胞肺癌(NSCLC)等疾病，阿法替尼結構如式(1)所示：

阿法替尼結構中存在一個手性碳，具有一個對映異構體雜質，在檢測阿法替尼過程中，阿法替尼與其對映異構體雜質難以分離、檢測。

發明內容

發明概述

本發明提供了一種簡便、有效的HPLC分離檢測阿法替尼、其對映異構體雜質的方法。

本發明人通過多次試驗嘗試，通過篩選色譜柱和相適應的流動相、流速、柱溫等檢測條件，得到一種適用于阿法替尼、其對映異構體雜質的分離檢測方法，所述方法采用CHIRALPAK?OZ-H，250mmX4.6mm，5μm，手性色譜柱，為分離色譜柱；以正已烷、乙醇、甲醇、二乙胺混合溶液為流動相；可以將阿法替尼及其對映異構體雜質進行有效分離檢測。

術語定義

術語“分離度”是指HPLC檢測中，相鄰色譜峰保留時間之差與兩色譜峰峰寬均值之比。

發明詳述

發明人通過研究，開發了一種分離檢測阿法替尼、其對映異構體雜質的方法，方法包括：在高效液相色譜儀上進行，色譜柱為CHIRALPAK?OZ-H，250mmX4.6mm，5μm手性色譜柱；流動相為正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺混合溶液，且混合溶劑中，甲醇和二乙胺體積比為100:0.1，正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的體積比為550-650:350-250:100:0.1；柱溫為15℃-35℃；流速為0.5mL/min-1.0mL/min。

發明人曾嘗試使用CHIRALPAK?AS-H，4.6mmX250mm,5μm手性色譜柱；IC，4.6mmX250mm,5μm，手性色譜柱；OD-H，4.6mmX250mm,5μm手性色譜柱；OJ-H，4.6mmX250mm,5μm手性色譜柱等為分析色譜柱；使用相同流動相對供試品進行分析檢測，結果顯示上述色譜柱對供試品中的依魯替尼及其對應異構體的分離效果較差，分離度低，在調節流動相比例亦不能很好的改善分離度和靈敏度；而CHIRALPAK?OZ-H，250mmX4.6mm,5μm手性色譜柱的分離效果較好。

在檢測過程中，可以使用流動相或乙醇為稀釋溶劑。

所述檢測方法中，可以使用的檢測器有紫外檢測器。

所述檢測方法中，檢測的樣品的進樣量為0.1μL-20μL。在一些實施方式中，檢測的樣品的進樣量為2μL-10μL。在一些實施方式中，檢測的樣品的進樣量為5μL。

所述檢測方法中，檢測運行時間可以是15min-20min。

在一些實施方式中，流動相為正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺混合溶液，且正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的體積比為550:350:100:0.1。在一實施例中，流動相中，正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的體積比為600:300:100:0.1。

在一些實施方式中，檢測波長為256nm。

在一些實施例中，所述流動相的流速為0.7mL/min。

在一些實施例中，所述柱溫為30℃。

在一些實施例中，一種分離檢測阿法替尼、其對映異構體雜質的方法包括：在高效液相色譜儀上進行，檢測器是紫外檢測器，檢測波長為256nm；色譜柱是CHIRALPAK?OZ-H，250mmX4.6mm,5μm手性色譜柱；流動相為正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺混合溶液，且正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的體積比為600:300:100:0.1；流速為0.6mL/min-0.8mL/min；柱溫為25℃-35℃。

在一些實施例中，一種分離檢測阿法替尼、其對映異構體雜質的方法包括：在高效液相色譜儀上進行，檢測器是紫外檢測器，檢測波長為256nm；色譜柱是CHIRALPAK?OZ-H，250mmX4.6mm,5μm手性色譜柱；流動相為正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺混合溶液，且正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的體積比為600:300:100:0.1；流速為0.7mL/min；進樣量為5μL；柱溫為30℃；運行時間為20min。